| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第16-26页 |
| 1.1 蚜虫唾液及其在蚜虫-寄主植株互作关系的作用 | 第16-18页 |
| 1.1.1 凝胶唾液与水溶性唾液 | 第16-17页 |
| 1.1.2 蚜虫唾液蛋白C002研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2 实时荧光定量PCR | 第18-20页 |
| 1.2.1 实时荧光定量PCR技术原理 | 第18-19页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR技术类型 | 第19-20页 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR技术在昆虫学中的应用 | 第20页 |
| 1.3 RNA干扰技术研究概况 | 第20-25页 |
| 1.3.1 RNAi的分子机制 | 第20-21页 |
| 1.3.2 昆虫dsRNA的内吸机制研究 | 第21-23页 |
| 1.3.3 昆虫RNAi效率影响因素 | 第23-24页 |
| 1.3.4 昆虫RNAi技术的应用前景 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 麦二叉蚜唾液蛋白C002的基因克隆 | 第26-41页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基配制 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 技术路线 | 第27页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 第一条cDNA链的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.4 扩增麦二叉蚜C002基因的引物 | 第29页 |
| 2.2.5 RT-PCR反应体系 | 第29-30页 |
| 2.2.6 C002 5’-RACE | 第30-32页 |
| 2.2.7 C002 3’-RACE | 第32-33页 |
| 2.2.8 PCR产物的胶回收纯化 | 第33页 |
| 2.2.9 连接与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第34页 |
| 2.2.11 质粒DNA的小量提取 | 第34页 |
| 2.2.12 序列测定 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.3.1 麦二叉蚜唾液蛋白C002基因特异性片段扩增 | 第34-35页 |
| 2.3.2 麦二叉蚜唾液蛋白C002 3’5'-RACE结果 | 第35-36页 |
| 2.3.3 目的基因开放阅读框(ORF)全长的获取与验证 | 第36-37页 |
| 2.3.4 目的基因氨基酸序列比对结果 | 第37-39页 |
| 2.3.5 氨基酸性质预测 | 第39-40页 |
| 2.4 结论与讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 麦二叉蚜唾液蛋白C002基因的时空表达谱分析 | 第41-55页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 供试昆虫 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-44页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第42页 |
| 3.2.2 第一条cDNA链的合成 | 第42页 |
| 3.2.3 扩增麦二叉蚜C002片段及内参基因的引物 | 第42-43页 |
| 3.2.4 RT-PCR反应体系 | 第43页 |
| 3.2.5 PCR产物的胶回收纯化 | 第43页 |
| 3.2.6 连接与转化 | 第43页 |
| 3.2.7 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第43页 |
| 3.2.8 质粒DNA的小量提取 | 第43页 |
| 3.2.9 序列测定 | 第43页 |
| 3.2.10 荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 3.2.11 标准曲线构建 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 引物筛选 | 第45-46页 |
| 3.3.3 上机检测引物特异性 | 第46-47页 |
| 3.3.4 标准曲线的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.5 SgC002在麦二叉蚜不同组织中的相对表达量 | 第48-50页 |
| 3.3.6 SgC002在麦二叉蚜不同龄期中的相对表达量 | 第50-52页 |
| 3.3.7 SgC002在麦二叉蚜不同蚜型中的相对表达量 | 第52-53页 |
| 3.4 结论与讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 麦二叉蚜唾液蛋白C002的RNA干扰研究 | 第55-64页 |
| 4.1 材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第55页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 4.2 方法 | 第56-58页 |
| 4.2.1 麦二叉蚜人工饲料的配制与饲蚜器的制备 | 第56页 |
| 4.2.2 siRNA的设计与合成 | 第56-57页 |
| 4.2.3 siRNA的饲喂方法 | 第57页 |
| 4.2.4 半定量PCR检测沉默效率 | 第57页 |
| 4.2.5 荧光定量PCR检测沉默效率 | 第57页 |
| 4.2.6 基因沉默后对麦二叉蚜存活率的影响 | 第57页 |
| 4.2.7 数据统计分析 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-63页 |
| 4.3.1 siRNA的稳定性检测 | 第58页 |
| 4.3.2 半定量PCR检测饲喂siRNA后SgC002相对表达量变化 | 第58-59页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR检测siRNA沉默效率 | 第59-61页 |
| 4.3.4 SgC002基因沉默后对麦二叉蚜存活率的影响 | 第61-63页 |
| 4.4 结论与讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 作者简介 | 第76页 |
