| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 縮略语表 | 第13-14页 |
| 1 引言 | 第14-43页 |
| 1.1 肌肉生长抑制素基因Myostatin的研究概况 | 第14-18页 |
| 1.1.1 Myostatin基因的发现 | 第14页 |
| 1.1.2 Myostatin基因的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.3 Myostatin基因的特异性 | 第15-16页 |
| 1.1.4 Myostatin基因的生物学功能 | 第16-17页 |
| 1.1.5 Myostatin基因的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 基因打靶技术的研究进展 | 第18-35页 |
| 1.2.1 基因打靶技术的概念及发展 | 第18-20页 |
| 1.2.2 基因打靶技术的原理 | 第20-21页 |
| 1.2.3 基因打靶技术 | 第21-30页 |
| 1.2.4 基因打靶的新技术—TALEN | 第30-33页 |
| 1.2.5 基因打靶技术的应用 | 第33-35页 |
| 1.3 转基因技术方法 | 第35-39页 |
| 1.3.1 原核显微注射法 | 第35-36页 |
| 1.3.2 胚胎干细胞介导的转基因 | 第36页 |
| 1.3.3 电转移技术 | 第36页 |
| 1.3.4 病毒载体介导的转基因 | 第36-37页 |
| 1.3.5 生殖细胞介导的基因转移 | 第37页 |
| 1.3.6 转座子介导的转基因 | 第37-38页 |
| 1.3.7 转线粒体技术 | 第38页 |
| 1.3.8 人工酵母染色法 | 第38页 |
| 1.3.9 体细胞核移植技术 | 第38-39页 |
| 1.4 动物遗传育种的发展与应用 | 第39-41页 |
| 1.5 本研究的目的意义和实验内容 | 第41-43页 |
| 1.5.1 本研究的目的意义 | 第41-42页 |
| 1.5.2 本研究的实验内容 | 第42-43页 |
| 2 实验一 肌抑素基因打靶载体的构建 | 第43-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 2.1.1 生物实验材料 | 第43页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.3 实验仪器及耗材 | 第44-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.2.1 同源臂的构建 | 第45-46页 |
| 2.2.2 同源长短臂的PCR反应体系 | 第46页 |
| 2.2.3 同源长短臂与过度载体的连接 | 第46-49页 |
| 2.2.4 同源长短臂与打靶载体的连接 | 第49-51页 |
| 2.3 实验结果 | 第51-60页 |
| 2.3.1 同源长短臂与pPNTⅢ载体的连接 | 第51-56页 |
| 2.3.2 同源长短臂与pEGFP-N1载体的连接 | 第56-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-61页 |
| 2.5 实验小结 | 第61-62页 |
| 3 实验二 TALEN载体的构建 | 第62-73页 |
| 3.1 实验材料 | 第62页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第62页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第62页 |
| 3.2 实验方法--TALEN克隆的制备 | 第62-68页 |
| 3.2.1 MSTN的基因信息 | 第62-63页 |
| 3.2.2 TALEN工具载体 | 第63页 |
| 3.2.3 TALEN靶序列设计 | 第63-64页 |
| 3.2.4 TALEN靶点识别模块序列克隆入真核表达载体 | 第64-66页 |
| 3.2.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第66页 |
| 3.2.6 TALEN质粒的活性鉴定 | 第66-68页 |
| 3.3 实验结果 | 第68-72页 |
| 3.3.1 阳性克隆测序结果及分析 | 第68-71页 |
| 3.3.2 TALEN质粒活性鉴定的结果 | 第71-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72页 |
| 3.5 实验小结 | 第72-73页 |
| 4 实验三 基因敲除细胞株的建立 | 第73-92页 |
| 4.1 实验材料 | 第73页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第73页 |
| 4.1.2 实验仪器及耗材 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-81页 |
| 4.2.1 蒙古羊胎儿成纤维细胞的培养 | 第73-75页 |
| 4.2.2 蒙古羊胎儿成纤维细胞的分析 | 第75页 |
| 4.2.3 蒙古羊胎儿成纤维细胞的转染 | 第75-77页 |
| 4.2.4 基因敲除细胞株的建立 | 第77-79页 |
| 4.2.5 基因敲除细胞株的鉴定 | 第79-81页 |
| 4.3 实验结果 | 第81-89页 |
| 4.3.1 蒙古羊胎儿成纤维细胞的培养 | 第81页 |
| 4.3.2 蒙古羊胎儿成纤维细胞的分析 | 第81-82页 |
| 4.3.3 蒙古羊胎儿成纤维细胞的转染 | 第82-84页 |
| 4.3.4 蒙古羊胎儿成纤维基因敲除细胞株的建立 | 第84-85页 |
| 4.3.5 蒙古羊胎儿成纤维基因敲除细胞株的鉴定 | 第85-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-91页 |
| 4.5 实验小结 | 第91-92页 |
| 5 实验四 MSTN基因敲除蒙古羊的制作 | 第92-101页 |
| 5.1 实验材料 | 第92-93页 |
| 5.1.1 生物材料 | 第92页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第92页 |
| 5.1.3 实验设备及耗材 | 第92-93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-95页 |
| 5.2.1 绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第93页 |
| 5.2.2 蒙古羊胎儿成纤维细胞基因敲除细胞株的准备 | 第93页 |
| 5.2.3 构建重构胚 | 第93-94页 |
| 5.2.4 胚胎移植 | 第94页 |
| 5.2.5 基因敲除羔羊的接产及鉴定 | 第94-95页 |
| 5.3 实验结果 | 第95-99页 |
| 5.3.1 绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第95-96页 |
| 5.3.2 构建重构胚 | 第96-97页 |
| 5.3.3 胚胎移植 | 第97-98页 |
| 5.3.4 基因敲除羔羊的接产及鉴定 | 第98-99页 |
| 5.4 讨论 | 第99-101页 |
| 5.5 实验小结 | 第101页 |
| 6 结论 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-112页 |
| 附录 | 第112-146页 |
| 作者简介 | 第146页 |
