| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-34页 |
| 1.1 结核病疫情及我国防治现状 | 第12-13页 |
| 1.2 结核疫苗的研究 | 第13-17页 |
| 1.3 结核诊断方法的研究 | 第17-21页 |
| 1.4 转基因植物生物反应器的研究 | 第21-29页 |
| 1.5 转基因植物结核疫苗及诊断制剂的研究 | 第29-32页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 1.7 研究技术路线 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-61页 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 | 第34-37页 |
| 2.1.1 基因组、菌株与质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.3 实验动物及血清 | 第34-35页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第35页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 方法 | 第37-61页 |
| 2.2.1 结核分枝杆菌wbbL1基因及rfbpB-esxA融合基因的生物信息学分析 | 第37-40页 |
| 2.2.2 结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因原核表达载体的构建 | 第40-49页 |
| 2.2.3 结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因植物表达载体的构建 | 第49-53页 |
| 2.2.4 结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因在E.coli中的表达、纯化和鉴定 | 第53-56页 |
| 2.2.5 结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因在烟草中的表达、纯化和鉴定 | 第56-59页 |
| 2.2.6 E.coli、烟草中表达蛋白的免疫原性分析 | 第59-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-92页 |
| 3.1 生物信息学分析结果 | 第61-67页 |
| 3.1.1 wbbL1基因及其编码蛋白质的生物信息学分析、预测结果 | 第61-65页 |
| 3.1.2 rfbpB-esxA融合基因及其编码蛋白质的生物信息学分析、预测结果 | 第65-67页 |
| 3.2 原核表达载体的构建结果 | 第67-71页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌rfbpB、esxA及rwbbL1基因的扩增 | 第67-68页 |
| 3.2.2 结核分枝杆菌rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因的扩增 | 第68页 |
| 3.2.3 结结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因与原核表达载体pET-30a的连接 | 第68-71页 |
| 3.3 植物表达载体的构建结果 | 第71-79页 |
| 3.3.1 结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因的扩增 | 第71-72页 |
| 3.3.2 结结核分枝杆菌rfbpB、esxA、rwbbL1基因及rfbpB-esxA、rfbpB-esxA-rwbbL1融合基因与植物表达载体的连接 | 第72-79页 |
| 3.4 E.coli中表达的结果 | 第79-84页 |
| 3.4.1 优化诱导前外源蛋白的表达情况及分析 | 第79-81页 |
| 3.4.2 优化诱导后外源蛋白的表达情况及分析 | 第81-83页 |
| 3.4.3 外源蛋白的纯化与Western blotting分析 | 第83-84页 |
| 3.5 烟草中表达的结果 | 第84-88页 |
| 3.5.1 报告基因GFP、GUS的检测结果与分析 | 第84-86页 |
| 3.5.2 植物表达蛋白的分析与鉴定 | 第86-88页 |
| 3.6 E.coli、烟草中表达蛋白免疫原性的分析 | 第88-92页 |
| 3.6.1 血清诊断学评价结果 | 第88-90页 |
| 3.6.2 动物免疫效果评价分析 | 第90-92页 |
| 4 讨论与结论 | 第92-99页 |
| 4.1 讨论 | 第92-98页 |
| 4.1.1 生物信息学 | 第92-93页 |
| 4.1.2 原核表达载体的构建及在E.coli中表达 | 第93-95页 |
| 4.1.3 植物表达载体的构建及在烟草中表达 | 第95-97页 |
| 4.1.4 表达蛋白免疫原性 | 第97-98页 |
| 4.2 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
