| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第1章 材料 | 第9-13页 |
| 1.1 菌株 | 第9页 |
| 1.2 主要试剂 | 第9-11页 |
| 1.3 培养基 | 第11-12页 |
| 1.4 实验设备及仪器 | 第12页 |
| 1.5 分析软件及数据库 | 第12-13页 |
| 第2章 方法 | 第13-22页 |
| 2.1 金属还原酶基因缺失片段的构建 | 第13-17页 |
| 2.1.1 烟曲霉基因组DNA的提取 | 第13页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第13-14页 |
| 2.1.3 金属还原酶基因缺失片段的构建 | 第14-16页 |
| 2.1.4 构建的融合片段的处理和检测 | 第16-17页 |
| 2.2 烟曲霉Af293菌株原生质体的制备 | 第17-18页 |
| 2.2.1 萌发曲线的绘制 | 第17页 |
| 2.2.2 原生质体的制备 | 第17-18页 |
| 2.3 烟曲霉金属还原酶基因缺失菌株的构建与筛选 | 第18-19页 |
| 2.3.1 PEG-CaCl_2介导的原生质体的转化 | 第18-19页 |
| 2.4 缺失菌株的初步筛选和鉴定 | 第19-20页 |
| 2.4.1 潮霉素抗性初筛 | 第19页 |
| 2.4.2 转化子菌株的PCR筛选 | 第19-20页 |
| 2.4.3 转化子菌株的测序鉴定 | 第20页 |
| 2.5 金属还原酶基因功能研究 | 第20-22页 |
| 2.5.1 烟曲霉金属还原酶蛋白序列分析 | 第20-21页 |
| 2.5.2 金属还原酶基因缺失菌株的表型变化 | 第21-22页 |
| 第3章 结果 | 第22-31页 |
| 3.1 金属还原酶基因缺失片段的获得 | 第22-24页 |
| 3.1.1 烟曲霉基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 3.1.2 待融合片段的PCR结果 | 第22-23页 |
| 3.1.3 重叠PCR获得的缺失片段 | 第23-24页 |
| 3.1.4 转化所需的融合片段的测序鉴定 | 第24页 |
| 3.2 原生质体的制备 | 第24-26页 |
| 3.2.1 原生质体制备选择菌龄 | 第24-25页 |
| 3.2.2 不同渗透压对原生质体制备的影响 | 第25-26页 |
| 3.3 原生质体转化及缺失菌株的筛选 | 第26-28页 |
| 3.3.1 金属还原酶基因缺失菌株的转化与初筛 | 第26页 |
| 3.3.2 缺失突变菌株的PCR筛选 | 第26-27页 |
| 3.3.3 测序鉴定 | 第27-28页 |
| 3.4 金属还原酶基因功能研究 | 第28-31页 |
| 3.4.1 金属还原酶种内同源比较 | 第28-29页 |
| 3.4.2 金属还原酶基因缺失菌株的表型观察 | 第29-31页 |
| 第4章 讨论 | 第31-34页 |
| 4.1 利用重叠PCR快速构建重组DNA融合片段 | 第31页 |
| 4.2 PEG-CaCl_2介导的原生质体的转化以实现基因敲除 | 第31-32页 |
| 4.3 烟曲霉金属还原酶基因的功能讨论 | 第32-33页 |
| 4.4 关于烟曲霉致病性的探讨 | 第33-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 综述 | 第38-50页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |