| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| 1.1 阿尔兹海默症的致病机理、诊断与治疗 | 第11-17页 |
| 1.1.1 阿尔兹海默症简介 | 第11页 |
| 1.1.2 AD的致病机理 | 第11-15页 |
| 1.1.3 AD的诊断与治疗 | 第15-17页 |
| 1.2 靶向Aβ治疗AD的策略 | 第17-20页 |
| 1.2.1 调节APP代谢 | 第17-18页 |
| 1.2.2 加快Aβ的清除 | 第18-19页 |
| 1.2.3 抑制Aβ的聚集 | 第19-20页 |
| 1.3 纳米抗体技术 | 第20-24页 |
| 1.3.1 Aβ抗体研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.2 纳米抗体及其特性 | 第22-23页 |
| 1.3.3 纳米抗体的应用 | 第23页 |
| 1.3.4 噬菌体展示库技术 | 第23-24页 |
| 1.4 本论文的研究目的、内容及意义 | 第24-26页 |
| 2 抗人Aβ12-35纳米抗体的筛选 | 第26-39页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 材料及试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要试剂及配方 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 免疫以及噬菌体展示库的构建 | 第28页 |
| 2.3.2 噬菌体的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.3 噬菌体滴度的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 筛选用抗原的准备 | 第30页 |
| 2.3.5 Aβ12-35纳米抗体的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.6 单克隆噬菌斑的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.7 ELISA测定单克隆噬菌体活性 | 第32页 |
| 2.3.8 序列的测定及比对 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果及讨论 | 第33-38页 |
| 2.4.1 纳米抗体的筛选 | 第33-35页 |
| 2.4.2 ELISA检测噬菌体活性 | 第35-37页 |
| 2.4.3 序列测定及比对 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 3 抗Aβ12-35纳米抗体的表达纯化 | 第39-63页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.2.1 材料及试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-49页 |
| 3.3.1 纳米抗体基因的获得及载体构建 | 第40-42页 |
| 3.3.2 制备感受态细胞及重组质粒的转化 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组质粒的双酶切验证及序列鉴定 | 第43页 |
| 3.3.4 纳米抗体的表达 | 第43页 |
| 3.3.5 纳米抗体的可溶性表达检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6 固定化金属离子亲和色谱 | 第44页 |
| 3.3.7 测定目的蛋白浓度及纯度 | 第44-46页 |
| 3.3.8 ELISA检测纳米抗体活性 | 第46-47页 |
| 3.3.9 Biacore测定纳米抗体亲和常数 | 第47-49页 |
| 3.4 实验结果及讨论 | 第49-61页 |
| 3.4.1 表达载体的构建及序列检测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 纳米抗体的表达 | 第50-51页 |
| 3.4.3 重组蛋白可溶性检测 | 第51-52页 |
| 3.4.4 固定化金属离子亲和色谱 | 第52-57页 |
| 3.4.5 ELISA检测纳米抗体活性 | 第57-59页 |
| 3.4.6 Biacore测定纳米抗体亲和常数 | 第59-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-63页 |
| 4 抗Aβ12-35单体特异性纳米抗体的功能研究 | 第63-71页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.2.1 材料及试剂 | 第63页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第63-64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-65页 |
| 4.3.1 纳米抗体对Ap单体聚集的抑制作用 | 第64页 |
| 4.3.2 纳米抗体对纤维延长的抑制作用 | 第64-65页 |
| 4.3.3 纳米抗体对Aβ纤维的解聚作用 | 第65页 |
| 4.3.4 透射电镜观察纳米抗体对Aβ12-35聚集过程及聚集形态变化的影响 | 第65页 |
| 4.4 实验结果及讨论 | 第65-70页 |
| 4.4.1 纳米抗体对Ap单体聚集的抑制作用 | 第65-67页 |
| 4.4.2 纳米抗体对纤维延长的抑制作用 | 第67-68页 |
| 4.4.3 纳米抗体对Ap12-35纤维的解聚作用 | 第68-70页 |
| 4.5 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |