| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 第一章 Connexin43与NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化损伤中的作用研究 | 第24-62页 |
| 1.1 材料和方法 | 第24-27页 |
| 1.1.1 实验仪器与材料 | 第24-25页 |
| 1.1.2 耗材与试剂 | 第25-27页 |
| 1.2 主要试剂溶液的配制 | 第27-29页 |
| 1.2.1 细胞培养相关试剂 | 第27页 |
| 1.2.2 NADPH氧化酶抑制剂DPI和夹竹桃素(Apocynin,APO)的配制 | 第27页 |
| 1.2.3 连接蛋白Connexin43抑制剂18α-甘草次酸(18α-Glycyrrhetinic acid,18-α-GA)的配制 | 第27页 |
| 1.2.4 0.2%Ⅰ型胶原酶和0.1%Dispase Ⅱ的配制 | 第27-28页 |
| 1.2.5 MTT溶液配制 | 第28页 |
| 1.2.6 Western Blot实验试剂 | 第28页 |
| 1.2.7 10%BSA溶液 | 第28-29页 |
| 1.3 细胞培养的基本实验方法 | 第29-31页 |
| 1.3.1 人真皮成纤维细胞的原代培养及鉴定 | 第29页 |
| 1.3.2 成纤维细胞的传代、培养、复苏与冻存 | 第29-31页 |
| 1.4 主要检测方法 | 第31-43页 |
| 1.4.1 MTT法检测H_2O_2对成纤维细胞的氧化损伤作用 | 第31-32页 |
| 1.4.2 MTT法检测DPI和APO、18-α-GA对H_2O_2诱导的成纤维细胞的氧化损伤的保护作用 | 第32-33页 |
| 1.4.3 倒置显微镜下观察DPI和APO、18-α-GA保护H_2O_2诱导成纤维细损伤的细胞形态学改变 | 第33页 |
| 1.4.4 细胞内ROS水平的测定——DCFH-DA探针荧光酶标仪检测 | 第33-35页 |
| 1.4.5 H_2O_2对成纤维细胞凋亡的影响,以及DPI、APO、18-α-GA对H_2O_2诱导HFbs凋亡影响的作用 | 第35页 |
| 1.4.6 H_2O_2对成纤维细胞MDA含量,SOD以及GSH-PX活性的影响,以及DPI、APO、18-α-GA对H_2O_2诱导的成纤维细胞MDA含量,SOD以及GSH-PX活性的影响的作用 | 第35-36页 |
| 1.4.7 Western Blotting检测各组NADPH氧化酶Nox1,Nox2,Nox4,Nox5Connexin43,MMP1以及MMP9的表达情况 | 第36-42页 |
| 1.4.8 统计学分析方法 | 第42-43页 |
| 1.5 实验结果 | 第43-57页 |
| 1.5.1 人真皮成纤维细胞的原代培养及细胞鉴定 | 第43页 |
| 1.5.2 H_2O_2对HFbs细胞活力的影响 | 第43-44页 |
| 1.5.3 H_2O_2诱导HFbs细胞内ROS的增加 | 第44-45页 |
| 1.5.4 H_2O_2对NADPH氧化酶、Cx43,MMP1以及MMP9蛋白表达的影响 | 第45-49页 |
| 1.5.5 MTT及形态学观察DPI、APO及18-α-GA对 | 第49-50页 |
| 1.5.6 DPI、APO及18α-GA对 | 第50-51页 |
| 1.5.7 DPI、APO及18-α-GA对H_2O_2诱导HFbs细胞凋亡的影响 | 第51-53页 |
| 1.5.8 DPI、APO及18-α-GA对H_2O_2诱导的HFbs MDA、SOD和GSH-PX的影响 | 第53-54页 |
| 1.5.9 DPI、APO及18-α-GA对H_2O_2诱导NADPH氧化酶、Cx43、MMP1以及MMP9蛋白表达增加的影响 | 第54-57页 |
| 1.6 讨论 | 第57-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 第二章 乌贼墨多糖对成纤维细胞氧化损伤的保护作用及其机制的研究 | 第62-74页 |
| 2.1 材料和方法 | 第62页 |
| 2.2 主要试剂溶液的配制 | 第62页 |
| 2.3 细胞培养的基本实验方法 | 第62页 |
| 2.4 主要检测方法 | 第62-65页 |
| 2.4.1 MTT法检测SIP对正常成纤维细胞的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.2 MTT法检测SIP对H_2O_2诱导的成纤维细胞的氧化损伤的保护作用 | 第63页 |
| 2.4.3 倒置显微镜下观察SIP保护H_2O_2诱导成纤维细损伤的细胞形态学改变 | 第63页 |
| 2.4.4 DCFH-DA探针荧光酶标仪检测SIP对细胞内ROS水平的影响 | 第63页 |
| 2.4.5 SIP对H_2O_2诱导的HFbs细胞凋亡的影响 | 第63-64页 |
| 2.4.6 SIP对H_2O_2诱导的成纤维细胞MDA含量,SOD以及GSH-PX活性的影响 | 第64页 |
| 2.4.7 Western Blotting检测SIP对Nox1,Nox2,Nox4,Nox5,Connexin43,MMP1和MMP9的影响 | 第64页 |
| 2.4.8 统计学分析方法 | 第64-65页 |
| 2.5 实验结果 | 第65-72页 |
| 2.5.1 SIP对真皮成纤维细胞细胞活力的影响 | 第65页 |
| 2.5.2 SIP对H_2O_2诱导的成纤维细胞的氧化损伤的保护作用 | 第65-66页 |
| 2.5.3 倒置显微镜观察SIP保护H_2O_2诱导成纤维细损伤的细胞形态学改变 | 第66-67页 |
| 2.5.4 SIP对H_2O_2诱导的HFbs ROS的影响 | 第67页 |
| 2.5.5 SIP对H_2O_2诱导的HFbs细胞凋亡的影响 | 第67-68页 |
| 2.5.6 SIP对H_2O_2诱导的HFbs MDA的含量、SOD以及GSH-PX活性的影响 | 第68-69页 |
| 2.5.7 SIP对H_2O_2诱导NADPH氧化酶、Cx43、MMP1和MMP9蛋白表达增加的影响 | 第69-72页 |
| 2.6 讨论 | 第72-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 全文小结 | 第74-75页 |
| 创新与意义 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 缩写词中英文对照表(ABBREVIATION) | 第80-81页 |
| 攻读学位期间成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
