| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 黄曲霉毒素的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素研究的背景 | 第12页 |
| 1.1.2 AFM1及其毒性的研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 AFM1稳定性的研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4 牛奶及其他奶制品中AFM1的规范要求 | 第14页 |
| 1.2 血乳屏障的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 上皮细胞紧密连接蛋白的研究 | 第14页 |
| 1.2.2 乳房炎对血乳屏障影响的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.3 血乳屏障模型的体外构建研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 药物转运蛋白的研究概况 | 第16-17页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 主要的实验材料、仪器与试剂 | 第18页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-29页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养 | 第18-19页 |
| 2.2.2 奶牛乳腺上皮细胞的鉴定 | 第19页 |
| 2.2.3 筛选奶牛乳腺上皮细胞体外培养的最佳接种密度 | 第19-22页 |
| 2.2.4 体外血乳屏障模型的构建 | 第22页 |
| 2.2.5 AFM1对乳腺上皮细胞外源性化合物转运蛋白的影响 | 第22-25页 |
| 2.2.6 ABCG2基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第25-27页 |
| 2.2.7 ABCG2基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞的影响 | 第27-28页 |
| 2.2.8 数据处理与统计分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-50页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的体外培养与鉴定 | 第29-32页 |
| 3.1.1 奶牛乳腺上皮细胞的纯化与鉴定 | 第29页 |
| 3.1.2 奶牛乳腺上皮细胞角蛋白18的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.1.3 奶牛乳腺上皮细胞最佳接种密度的筛选 | 第30-31页 |
| 3.1.4 奶牛乳腺上皮细胞生长曲线的测定 | 第31-32页 |
| 3.2 奶牛血乳屏障体外的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.1 倒置显微镜下观察奶牛乳腺上皮细胞 | 第32页 |
| 3.2.2 扫描电镜下观察奶牛乳腺上皮细胞 | 第32-33页 |
| 3.2.3 免疫荧光染色检测紧密连接蛋白ZO-1 | 第33页 |
| 3.3 AFM1对奶牛乳腺上皮细胞中转运蛋白表达的影响 | 第33-37页 |
| 3.3.1 AFM1的剂量关系 | 第33-34页 |
| 3.3.2 AFM1的时间关系 | 第34页 |
| 3.3.3 AFM1对ABCB1和ABCG2蛋白表达水平的影响 | 第34-35页 |
| 3.3.4 AFM1对β-酪蛋白的蛋白表达水平的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.5 AFM1对奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 ABCG2基因过表达的实验结果 | 第37-43页 |
| 3.4.1 去内毒素质粒的双酶切法验证 | 第37-38页 |
| 3.4.2 最佳转染时间的筛选 | 第38页 |
| 3.4.3 ABCG2基因过表达转染效率的检测 | 第38-39页 |
| 3.4.4 ABCG2基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞转运AFM1的影响 | 第39-42页 |
| 3.4.5 ABCG2基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 | 第42页 |
| 3.4.6 ABCG2基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞增殖作用的影响 | 第42-43页 |
| 3.5 ABCG2基因抑制的实验结果 | 第43-50页 |
| 3.5.1 ABCG2 siRNA最佳干扰片段和最佳干扰时间 | 第43-44页 |
| 3.5.2 干扰效率的检测 | 第44-45页 |
| 3.5.3 ABCG2基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞转运AFM1的影响 | 第45-48页 |
| 3.5.4 ABCG2基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响 | 第48页 |
| 3.5.5 ABCG2基因抑制对奶牛乳腺上皮细胞增殖作用的影响 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 奶牛血乳屏障的建立与鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2 AFM1对奶牛乳腺上皮细胞中转运蛋白的影响 | 第51页 |
| 4.3 ABCG2基因过表达与抑制对AFM1在奶牛乳腺上皮细胞中转运的影响 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
