| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第13-41页 |
| 一、肝癌研究现状 | 第13-20页 |
| (一) 肝癌的流行病学概况 | 第13-14页 |
| (二) 肝癌的主要治疗策略 | 第14-16页 |
| (三) 肝癌发生的机制 | 第16-20页 |
| 二、Myc癌基因概述 | 第20-31页 |
| (一) Myc的结构与功能 | 第20-27页 |
| (二) Myc与肿瘤发生 | 第27-31页 |
| 三、miRNA与癌症 | 第31-38页 |
| (一) miRNA生物合成和作用机制 | 第31-33页 |
| (二) miRNA与肿瘤 | 第33-36页 |
| (三) Myc与miRNA功能网络 | 第36-38页 |
| 四、Myc与miRNA在肝癌发生发展中的作用 | 第38-41页 |
| (一) Myc与肝癌发生发展的关系 | 第39页 |
| (二) miRNA在肝癌发生发展中的作用 | 第39-41页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第41-58页 |
| 一、实验材料 | 第41-48页 |
| (一) 试剂与耗材 | 第41-43页 |
| (二) 仪器设备 | 第43页 |
| (三) 化学合成的siRNA、miRNA模拟物及抑制剂 | 第43-44页 |
| (四) 本研究所用引物 | 第44-45页 |
| (五) 实验所用缓冲液配制 | 第45-46页 |
| (六) 质粒、菌株、细胞系 | 第46-47页 |
| (七) 实验动物及临床病例 | 第47页 |
| (八) 生物信息分析所用到的网站及数据处理软件 | 第47-48页 |
| 二、实验方法 | 第48-58页 |
| (一) 载体及miRNA表达文库构建 | 第48-49页 |
| (二) 生物信息学方法筛选受Myc调控的miRNA | 第49页 |
| (三) 细胞培养、传代和转染 | 第49-50页 |
| (四) MTT法测细胞活性 | 第50页 |
| (五) 双荧光报告系统 | 第50页 |
| (六) 慢病毒载体的包装及感染 | 第50-51页 |
| (七) 稳定细胞系的构建 | 第51页 |
| (八) 免疫印迹和免疫共沉淀 | 第51-52页 |
| (九) 免疫组织化学和免疫荧光染色 | 第52-53页 |
| (十) 染色质免疫共沉淀 | 第53页 |
| (十一) RNA提取和qRT-PCR,RNA-IP分离RISC复合物 | 第53-54页 |
| (十二) 细胞周期分析 | 第54页 |
| (十三) 细胞组织代谢分析 | 第54页 |
| (十四) 细胞克隆形成分析 | 第54-55页 |
| (十五) 裸鼠皮下移植瘤实验 | 第55页 |
| (十六) 裸鼠肝脏原位移植瘤模型建立 | 第55页 |
| (十七) 裸鼠肿瘤实验性肺转移模型建立 | 第55-56页 |
| (十八) DEN诱导的小鼠肝癌模型建立 | 第56页 |
| (十九) 小鼠肿瘤模型的治疗方法 | 第56页 |
| (二十) 小鼠肿瘤组织及临床肝癌样本收集 | 第56-57页 |
| (二十一) 数据统计 | 第57-58页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第58-98页 |
| 一、Myc/miRNA功能反馈通路影响肝癌形成 | 第58-72页 |
| (一) Myc对肝癌细胞的转化表型是必需的 | 第58-60页 |
| (二) Myc调控21个潜在的miRNA基因组位点 | 第60-62页 |
| (三) Myc调控11个miRNA基因组位点的miRNAs表达 | 第62页 |
| (四) Myc结合在miR-148a和miR-363启动子区的E-boxes上 | 第62-63页 |
| (五) 过表达miR-148a-5p和miR-363-3p阻滞细胞周期而抑制肝癌生长 | 第63-65页 |
| (六) miR-148-5p和miR-363-3p分别靶向于Myc和USP28 | 第65-67页 |
| (七) miR-363-3p抑制Myc蛋白的稳定 | 第67-68页 |
| (八) 抑制miR-148a-5p或miR-363-3p促进肝癌生长 | 第68-70页 |
| (九) Myc-miR-148a-5p/miR-363-3p-USP28反馈通路在肝癌中失调 | 第70-72页 |
| 二、Myc负调控的miR-129-5p抑制糖酵解影响肝癌进展 | 第72-95页 |
| (一) 高通量功能miRNA文库筛选出32个miRNAs抑制肝癌细胞生长 | 第72-73页 |
| (二) miR-129-5p靶向PDK1和PDK4 | 第73-75页 |
| (三) 肝癌中miR-129-5p与PDK1和PDK4的表达呈负相关 | 第75-76页 |
| (四) miR-129-5p抑制糖酵解进而影响肝癌生长和转移 | 第76-80页 |
| (五) 抑制PDK4的表达降低肝癌生长和转移 | 第80-83页 |
| (六) Myc/HDAC3/PRC2复合体抑制miR-129-5p表达 | 第83-88页 |
| (七) 肝癌中Myc、HDAC3、EZH2和SUZ12与miR-129-5p的表达呈负相关 | 第88-89页 |
| (八) Myc、miR-129-5p、PDK4的表达与肝癌临床分期和分化显著相关 | 第89-90页 |
| (九) Myc-miR-129-5p-PDK通路在DEN诱导小鼠肝癌中失调 | 第90-91页 |
| (十) miR-129-5p抑制裸鼠皮下移植瘤的生长 | 第91-92页 |
| (十一) miR-129-5p和DCA抑制DEN诱导的小鼠肝细胞癌变 | 第92-93页 |
| (十二) Myc-miR-129-5p-PDK调控通路影响肝细胞癌变模式图 | 第93-95页 |
| 三、研究总结与展望 | 第95-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 缩略词表 | 第111-112页 |
| 附录1：实验动物及临床病例采集使用伦理声明 | 第112-113页 |
| 附录2：本研究使用的临床肝癌病例样本特征信息 | 第113-115页 |
| 作者简介 | 第115-116页 |
| 研究生期间发表或待发表论文 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
