| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 1 棉花功能基因组及突变体研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 棉花功能基因组研究 | 第12-16页 |
| 1.1.1 棉花基因组研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.2 棉花基因表达谱的分析 | 第13-14页 |
| 1.1.3 突变体在棉花中的应用进展 | 第14-15页 |
| 1.1.4 植物蛋白组学与植物代谢组学 | 第15页 |
| 1.1.5 生物信息的发展 | 第15-16页 |
| 1.2 突变体创建 | 第16-19页 |
| 1.2.1 理化诱变 | 第16-17页 |
| 1.2.2 农杆菌介导的插入突变 | 第17-18页 |
| 1.2.3 基因敲除技术 | 第18-19页 |
| 1.3 Gene trap技术的应用 | 第19-21页 |
| 1.3.1 Gene trap技术原理 | 第19-20页 |
| 1.3.2 基因的鉴定和分离 | 第20-21页 |
| 2 侧翼序列的分离与分析 | 第21-25页 |
| 2.1 T-DNA侧翼序列分离研究进展 | 第21-24页 |
| 2.1.1 染色体步移概括 | 第21-22页 |
| 2.1.2 热不对称交错PCR（Tail-PCR技术） | 第22-23页 |
| 2.1.3 Fusion primer and nested integrated PCR(FPNI-PCR) | 第23-24页 |
| 2.2 T-DNA侧翼序列插入位点研究 | 第24-25页 |
| 2.2.1 T-DNA插入位点在植物基因组中的分布特点 | 第24页 |
| 2.2.2 T-DNA插入位点在植物基因组中个区域的分布特点 | 第24-25页 |
| 2.2.3 T-DNA末端整合特点 | 第25页 |
| 3 转基因作物抗虫性及对昆虫的影响 | 第25-28页 |
| 3.1 转基因棉的抗虫性 | 第26-27页 |
| 3.2 转基因作物对昆虫的影响 | 第27-28页 |
| 4 复合转基因及去标记转基因植物研究进展 | 第28-32页 |
| 4.1 复合性状基因研究进展 | 第28-29页 |
| 4.1.1 复合性状转基因植物的定义 | 第28页 |
| 4.1.2 复合性状转基因植物获取的方法 | 第28-29页 |
| 4.2 转基因植物标记基因的去除 | 第29-32页 |
| 4.2.1 选择标记基因 | 第29页 |
| 4.2.2 选择标记基因的去除 | 第29-32页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 5.1 棉花T-DNA突变体创制及侧翼序列分离与分析 | 第32-33页 |
| 5.2 双T-DNA植物表达载体在棉花中的应用研究 | 第33-34页 |
| 第二章 棉花T-DNA插入突变体的创制及侧翼序列的分离与分析 | 第34-57页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2 实验材料与方法 | 第34-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 棉花材料 | 第34-35页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 农杆菌的活化 | 第35-36页 |
| 2.2.2 棉花YZ1和Jin668遗传转化体系的建立 | 第36-37页 |
| 2.2.3 棉花植株DNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.4 转基因植株的PCR检测 | 第38-39页 |
| 2.2.5 转基因植株Southern blot分析 | 第39-40页 |
| 2.2.6 侧翼序列分离方法 | 第40-41页 |
| 2.2.7 TA克隆及单克隆的挑取 | 第41页 |
| 2.2.8 侧翼序列分析方法 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 3.1 棉花遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第42-45页 |
| 3.1.1 棉花植株再生体系及过程 | 第42-43页 |
| 3.1.2 棉花转基因株系的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.3 棉花转基因株系Southern杂交及拷贝数分析 | 第44-45页 |
| 3.2 棉花T-DNA侧翼序列分离 | 第45-51页 |
| 3.2.1 T-DNA侧翼序列分离技术的建立 | 第45-46页 |
| 3.2.2 T-DNA侧翼序列的分类及统计 | 第46-47页 |
| 3.2.3 T-DNA侧翼序列转移整合性分析 | 第47-49页 |
| 3.2.4 T-DNA侧翼序列的Blast分析 | 第49-51页 |
| 3.3 棉花T-DNA侧翼序列分析 | 第51-53页 |
| 3.3.1 T-DNA侧翼序列在棉花亚基因组中的分布 | 第51页 |
| 3.3.2 T-DNA侧翼序列在棉花基因组中各区域的分布 | 第51-52页 |
| 3.3.3 T-DNA侧翼序列在棉花基因组中TE区的分布 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 农杆菌介导T-DNA插入突变体的培育 | 第53-54页 |
| 4.2 棉花T-DNA插入突变体库的大小 | 第54页 |
| 4.3 T-DNA侧翼序列分离技术的建立与改良 | 第54-56页 |
| 4.4 总结与展望 | 第56-57页 |
| 第三章 双T-DNA植物表达载体在棉花中的应用 | 第57-70页 |
| 1 前言 | 第57页 |
| 2 材料和方法 | 第57-62页 |
| 2.1 材料 | 第57-58页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第57-58页 |
| 2.2.2 菌株、质粒 | 第58页 |
| 2.2 方法 | 第58-62页 |
| 2.2.1 不同目的基因特异引物的设计 | 第58页 |
| 2.2.2 不同目的基因的扩增及克隆 | 第58页 |
| 2.2.3 植物表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 2.2.4 重组质粒农杆菌电击转化 | 第60-61页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第61页 |
| 2.2.6 棉花遗传转化 | 第61-62页 |
| 2.2.7 棉花DNA的提取 | 第62页 |
| 2.2.8 转基因棉花的分子检测 | 第62页 |
| 3 结果分析 | 第62-69页 |
| 3.1 双T-DNA植物重组中间载体p CAMBIA2300SDT的构建 | 第62-64页 |
| 3.1.1 Nos-LB-RB片段的扩增 | 第62-63页 |
| 3.1.2 Nos-LB-RB片段和p CAMBIA2300S载体的连接及PCR检测 | 第63页 |
| 3.1.3 p CAMBIA2300SDT载体的酶切验证 | 第63-64页 |
| 3.2 双T-DNA植物表达载体p CAMBIA2300SDT-m GFP5*的构建 | 第64-66页 |
| 3.2.1 m GFP5*基因的克隆 | 第64-65页 |
| 3.2.2 m GFP5*基因和p CAMBIA2300SDT酶切连接及PCR检测 | 第65页 |
| 3.2.3 p CAMBIA2300SDT-m GFP5*载体酶切验证 | 第65-66页 |
| 3.3 p CAMBIA2300SDT-cry1C*的构建 | 第66-68页 |
| 3.3.1 cry1C*基因的克隆 | 第66-67页 |
| 3.3.2 cry1C*基因和p CAMBIA2300SDT载体酶切连接及PCR检测 | 第67页 |
| 3.3.3 p CAMBIA2300SDT-cry1C*的酶切验证 | 第67-68页 |
| 3.4 棉花转基因植株的获取 | 第68-69页 |
| 4 结论与小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附件 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
