| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第13-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-43页 |
| 1.1 引言 | 第18-19页 |
| 1.2 纤维素酶概述 | 第19-27页 |
| 1.2.1 纤维素酶的组分和来源 | 第19-20页 |
| 1.2.2 纤维素酶的分子结构催化机制 | 第20-22页 |
| 1.2.3 纤维素酶的的应用 | 第22-27页 |
| 1.2.3.1 在纺织工业中的应用 | 第22-25页 |
| 1.2.3.2 在制浆造纸工业中的应用 | 第25-26页 |
| 1.2.3.3 在食品工业中的应用 | 第26页 |
| 1.2.3.4 在饲料工业中的应用 | 第26-27页 |
| 1.3 纤维素酶基因工程 | 第27-36页 |
| 1.3.1 根癌农杆菌介导转化法 | 第27-31页 |
| 1.3.2 遗传转化的选择标记 | 第31页 |
| 1.3.3 纤维素酶基因 | 第31-33页 |
| 1.3.4 里氏木霉产纤维素酶的基因调控 | 第33-36页 |
| 1.4 内切-β-葡聚糖酶基因的表达 | 第36-41页 |
| 1.4.1 内切-β-葡聚糖酶在大肠杆菌和酵母中的表达 | 第36-39页 |
| 1.4.2 内切-β-葡聚糖酶在里氏木霉中的表达 | 第39-41页 |
| 1.5 本课题的研究思路及拟研究内容 | 第41-43页 |
| 第二章 里氏木霉内切-β-葡聚糖酶基因egl2的同源表达 | 第43-68页 |
| 2.1 引言 | 第43-44页 |
| 2.2 材料与方法 | 第44-53页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.2 培养基 | 第45-46页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第46页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第46-53页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第53-66页 |
| 2.3.1 内切-β-葡聚糖酶基因egl2的克隆 | 第53-54页 |
| 2.3.2 egl2基因表达盒的构建 | 第54-55页 |
| 2.3.3 PCR扩增潮霉素B磷酸转移酶基因序列 | 第55-56页 |
| 2.3.4 重组载体的构建 | 第56-57页 |
| 2.3.5 里氏木霉对抗生素的敏感性 | 第57页 |
| 2.3.6 介导转化菌浓的确定 | 第57-59页 |
| 2.3.7 共培养条件对农杆菌介导转化的影响 | 第59-60页 |
| 2.3.8 孢子预处理对转化效率的影响 | 第60-61页 |
| 2.3.9 里氏木霉转化子的筛选 | 第61-62页 |
| 2.3.10 摇瓶发酵产酶进程 | 第62-63页 |
| 2.3.11 重组里氏木霉内切-β-葡聚糖酶的酶学性质 | 第63-65页 |
| 2.3.12 重组里氏木霉纤维素酶的酶系组成 | 第65-66页 |
| 2.4 小结 | 第66-68页 |
| 第三章 特异腐质霉内切-β-葡聚糖酶基因cel5A在里氏木霉中的表达 | 第68-84页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 材料与方法 | 第68-76页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.2 培养基 | 第69-70页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第70页 |
| 3.2.4 实验方法 | 第70-76页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第76-83页 |
| 3.3.1 PCR获得特异腐质霉cel5A基因 | 第76-77页 |
| 3.3.2 克隆载体的验证分析 | 第77-78页 |
| 3.3.3 cel5A基因的序列分析 | 第78页 |
| 3.3.4 重组载体的构建 | 第78-79页 |
| 3.3.5 里氏木霉转化子的筛选 | 第79-80页 |
| 3.3.6 里氏木霉转化子的传代稳定性 | 第80-81页 |
| 3.3.7 发酵液蛋白电泳检测 | 第81-82页 |
| 3.3.8 重组里氏木霉内切-β-葡聚糖酶的pH适用范围 | 第82-83页 |
| 3.4 小结 | 第83-84页 |
| 第四章 重组里氏木霉H3产纤维素酶的研究 | 第84-94页 |
| 4.1 引言 | 第84页 |
| 4.2 材料与方法 | 第84-87页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第84-85页 |
| 4.2.2 培养基 | 第85页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第85-86页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第86-87页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第87-92页 |
| 4.3.1 碳源对产酶的影响 | 第87-88页 |
| 4.3.2 玉米浆浓度对产酶的影响 | 第88页 |
| 4.3.3 初始pH值对产酶的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.4 摇瓶发酵的产酶进程 | 第89-90页 |
| 4.3.5 补料分批发酵 | 第90-91页 |
| 4.3.6 发酵罐产酶试验 | 第91-92页 |
| 4.4 小结 | 第92-94页 |
| 第五章 里氏木霉egl2基因CBD序列与特异腐质霉cel5A基因的融合表达 | 第94-108页 |
| 5.1 引言 | 第94页 |
| 5.2 材料与方法 | 第94-100页 |
| 5.2.1 材料与试剂 | 第94-95页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第95-96页 |
| 5.2.3 培养基 | 第96页 |
| 5.2.4 实验方法 | 第96-100页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第100-106页 |
| 5.3.1 cel5A基因与egl2 CBD序列的重组 | 第100页 |
| 5.3.2 重组载体pCB-CEG的构建 | 第100-101页 |
| 5.3.3 农杆菌介导转化及筛选 | 第101-102页 |
| 5.3.4 里氏木霉转化子的复筛 | 第102-103页 |
| 5.3.5 摇瓶发酵时间进程 | 第103页 |
| 5.3.6 重组里氏木霉HC4内切-β-葡聚糖酶的酶学性质 | 第103-106页 |
| 5.4 小结 | 第106-108页 |
| 第六章 重组里氏木霉纤维素酶的应用基础研究 | 第108-117页 |
| 6.1 引言 | 第108-109页 |
| 6.2 材料与方法 | 第109-112页 |
| 6.2.1 材料和试剂 | 第109页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第109页 |
| 6.2.3 培养基 | 第109-110页 |
| 6.2.4 实验方法 | 第110-112页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第112-116页 |
| 6.3.1 牛仔布水洗 | 第112-115页 |
| 6.3.2 纤维素酶解试验 | 第115-116页 |
| 6.3.3 纤维素酶稳定性试验 | 第116页 |
| 6.4 小结 | 第116-117页 |
| 第七章 结论与展望 | 第117-120页 |
| 7.1 结论 | 第117-119页 |
| 7.2 展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-140页 |
| 作者简历 | 第140页 |
