| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1. 农业病原线虫危害及其防治现状 | 第12页 |
| 2. 食线虫真菌在线虫生物防治中的作用 | 第12-13页 |
| 3. 食线虫真菌侵染线虫的过程 | 第13-14页 |
| 4. 真菌吸收利用硝酸盐研究进展 | 第14-20页 |
| 4.1 氮源对真菌的作用 | 第14-15页 |
| 4.2 真菌吸收同化硝酸盐 | 第15-18页 |
| 4.2.1 真菌利用硝酸盐过程 | 第15-17页 |
| 4.2.2 硝酸盐同化过程的调控 | 第17-18页 |
| 4.3 氮源作为信号分子调控代谢与发育 | 第18-20页 |
| 4.3.1 硝酸盐作为信号分子 | 第18-19页 |
| 4.3.2 亚硝酸盐作为信号分子 | 第19页 |
| 4.3.3 NO作为信号分子 | 第19-20页 |
| 5. 本论文研究思路和内容 | 第20-21页 |
| 第二章 寡孢节丛孢硝酸盐代谢途径相关基因敲除 | 第21-49页 |
| 1. 前言 | 第21-22页 |
| 2. 实验材料与仪器 | 第22-25页 |
| 2.1 实验菌株及质粒 | 第22页 |
| 2.2 实验用培养基 | 第22-24页 |
| 2.3 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 实验仪器 | 第25页 |
| 3. 研究方法和步骤 | 第25-40页 |
| 3.1 敲除载体构建 | 第25-26页 |
| 3.2 基因编号 | 第26页 |
| 3.3 敲除引物设计 | 第26-28页 |
| 3.4 寡孢节丛孢基因组提取 | 第28-29页 |
| 3.5 质粒提取 | 第29-30页 |
| 3.6 目的片段获取 | 第30-31页 |
| 3.6.1 5’端和3’端同源片段扩增 | 第30页 |
| 3.6.2 潮霉素基因扩增 | 第30-31页 |
| 3.6.3 pRS426质粒酶切 | 第31页 |
| 3.7 酵母电转化 | 第31-32页 |
| 3.7.1 酵母电转感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| 3.7.2 清洗电转杯 | 第32页 |
| 3.7.3 酵母电转化 | 第32页 |
| 3.8 酵母转化子基因组或质粒提取 | 第32-34页 |
| 3.8.1 酵母转化子基因组提取 | 第33页 |
| 3.8.2 酵母转化子质粒提取 | 第33-34页 |
| 3.9 酵母转化子验证 | 第34-35页 |
| 3.10 重组质粒转化大肠杆菌 | 第35-37页 |
| 3.10.1 化转大肠杆菌感受态制备 | 第35页 |
| 3.10.2 电转大肠杆菌感受态制备 | 第35-36页 |
| 3.10.3 酵母质粒转化大肠杆菌 | 第36页 |
| 3.10.4 大肠杆菌转化子验证 | 第36-37页 |
| 3.11 原生质体制备 | 第37页 |
| 3.12 原生质体转化 | 第37页 |
| 3.13 转化子基因组提取 | 第37-38页 |
| 3.14 转化子PCR验证 | 第38-39页 |
| 3.15 转化子氯酸盐抗性 | 第39-40页 |
| 3.16 转化子稳定性检测 | 第40页 |
| 4. 实验结果 | 第40-46页 |
| 4.1 片段扩增 | 第40-41页 |
| 4.2 转化子筛选 | 第41页 |
| 4.3 敲除片段验证和回收 | 第41-42页 |
| 4.4 原生质体制备转化 | 第42-43页 |
| 4.5 转化子PCR验证 | 第43-45页 |
| 4.6 转化子氯酸盐抗性 | 第45-46页 |
| 4.7 转化子潮霉素抗性 | 第46页 |
| 5 讨论 | 第46-49页 |
| 5.1 重组质粒构建 | 第46-47页 |
| 5.2 重组质粒转化原生质体 | 第47页 |
| 5.3 转化子验证 | 第47-48页 |
| 5.4 转化子氯酸盐抗性与潮霉素抗性 | 第48-49页 |
| 第三章 突变株与野生菌株的表型和生理生化特性研究 | 第49-72页 |
| 1. 前言 | 第49页 |
| 2. 实验材料与仪器 | 第49-50页 |
| 2.1 实验菌株 | 第49页 |
| 2.2 实验用培养基 | 第49-50页 |
| 2.3 主要试剂 | 第50页 |
| 2.4 实验仪器 | 第50页 |
| 3. 研究方法和步骤 | 第50-54页 |
| 3.1 转化子生长状态与产孢观察 | 第50-51页 |
| 3.1.1 转化子生长速率与形态 | 第50-51页 |
| 3.1.2 转化子孢子形态与产孢数量 | 第51页 |
| 3.2 捕食线虫能力和利用不同氮源特性 | 第51-52页 |
| 3.2.1 线虫培养 | 第51-52页 |
| 3.2.2 捕食线虫能力比较 | 第52页 |
| 3.3 不同氮源培养寡孢节丛孢 | 第52页 |
| 3.4 NaNO_3对寡孢节丛孢产生捕食器官的影响 | 第52-54页 |
| 3.4.1 NaNO_3诱导寡孢节丛孢产生捕食器官 | 第52-53页 |
| 3.4.2 优先氮源(NH_4)_2SO_4和非优先氮源NaNO_3对寡孢节丛孢杀线虫的影响 | 第53页 |
| 3.4.3 线虫对NaNO_3敏感性 | 第53页 |
| 3.4.4 不同浓度NaNO_3对寡孢节丛孢捕杀线虫的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.5 NaNO_3对寡孢节丛孢转化子捕杀线虫的影响 | 第54页 |
| 4. 实验结果与分析 | 第54-70页 |
| 4.1 转化子生长状态与产生孢子观察 | 第54-56页 |
| 4.2 转化子基本生理特性 | 第56-61页 |
| 4.2.1 捕食线虫能力比较 | 第56-58页 |
| 4.2.2 不同氮源对寡孢节丛孢生长的影响 | 第58-60页 |
| 4.2.3 不同浓度的NaNO_2、NaNO_3对寡孢节丛孢生长的影响 | 第60-61页 |
| 4.3 NO_3~-对寡孢节丛孢产捕食器官的影响 | 第61-70页 |
| 4.3.1 硝酸盐诱导捕器形成的差异 | 第61-62页 |
| 4.3.2 优先氮源(NH_4)_2SO_4和非优先氮源NaNO_3对寡孢节丛孢杀线虫的影响 | 第62-64页 |
| 4.3.3 不同浓度的NaNO_3对线虫的影响(线虫对NaNO_3的敏感性) | 第64-65页 |
| 4.3.4 不同浓度的NaNO_3对寡孢节丛孢杀线虫的影响 | 第65-67页 |
| 4.3.5 NaNO_3对寡孢节丛孢转化子的影响 | 第67-70页 |
| 5 讨论 | 第70-72页 |
| 全文总结与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 附录1. 论文中使用的缩写与中英文对照 | 第80-81页 |
| 附录2. 实验中使用质粒图谱 | 第81-82页 |
| 附录3. 硕士期间参与的科研项目及成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
