| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 多能性干细胞的研究现状 | 第14-31页 |
| 1 ESCs发展历程 | 第14-15页 |
| 2 ESCs培养体系的发展 | 第15页 |
| 3 ESCs相关信号通路 | 第15-16页 |
| 4 诱导多能性干细胞（iPSCs） | 第16-29页 |
| 4.1 源头细胞的种类 | 第17-18页 |
| 4.2 多能性转录因子与miRNA调控 | 第18-19页 |
| 4.3 诱导系统 | 第19-20页 |
| 4.4 提高效率的方法 | 第20-22页 |
| 4.5 重编程机制 | 第22-25页 |
| 4.6 重编程事件 | 第25-26页 |
| 4.7 诱导多能性干细胞（iPSCs）特性 | 第26-27页 |
| 4.8 诱导多能性干细胞（iPSCs）质量 | 第27页 |
| 4.9 诱导多能性干细胞（iPSCs）的应用 | 第27-29页 |
| 5 猪诱导多能性干细胞（iPSCs）现状和展望 | 第29-31页 |
| 研究论文 | 第31-65页 |
| 第一章 猪体细胞重编程条件优化 | 第31-52页 |
| 引言 | 第31-33页 |
| 1 材料 | 第33-36页 |
| 1.1 实验动物 | 第33页 |
| 1.2 细胞 | 第33页 |
| 1.3 菌株 | 第33页 |
| 1.4 质粒 | 第33页 |
| 1.5 主要试剂和试剂盒 | 第33-34页 |
| 1.6 主要仪器与耗材 | 第34-35页 |
| 1.7 细胞培养相关试剂配制 | 第35-36页 |
| 1.8 分子克隆相关试剂的配制 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-43页 |
| 2.1 猪脂肪干细胞的分离 | 第36页 |
| 2.2 猪胎儿成纤维细胞的分离 | 第36页 |
| 2.3 小鼠胚胎成纤维细胞系建立 | 第36-37页 |
| 2.4 饲养层的制备 | 第37页 |
| 2.5 质粒大提 | 第37-38页 |
| 2.6 质粒浓缩及无菌处理 | 第38页 |
| 2.7 病毒包装 | 第38-39页 |
| 2.8 病毒滴度测定 | 第39页 |
| 2.9 猪体细胞重编程诱导方案 | 第39-40页 |
| 2.10 诱导效率计算 | 第40页 |
| 2.11 碱性磷酸酶染色 | 第40页 |
| 2.12 提取总RNA | 第40-41页 |
| 2.13 荧光定量PCR（qPCR） | 第41-43页 |
| 2.14 数据统计 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-48页 |
| 3.1 Vc对不同类型体细胞重编程效率的影响 | 第43-44页 |
| 3.2 CHIR-99021 对不同类型体细胞重编程效率的影响 | 第44-45页 |
| 3.3 细胞年龄对猪体细胞重编程效率 | 第45页 |
| 3.4 不同类型猪体细胞重编程效率 | 第45-46页 |
| 3.5 猪脂肪干细胞在重编程过程中部分基因表达变化趋势 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 Vc和CHIR-99021 对猪不同类型体细胞重编程效率的影响 | 第48-49页 |
| 4.2 源头细胞供体年龄对猪体细胞重编程效率 | 第49页 |
| 4.3 不同类型猪体细胞重编程效率 | 第49-50页 |
| 4.4 猪脂肪干细胞在重编程过程中部分基因表达变化趋势 | 第50-52页 |
| 第二章 真核表达多能性转录因子转基因载体构建及转基因细胞系获取 | 第52-65页 |
| 引言 | 第52-53页 |
| 1 材料 | 第53-55页 |
| 1.1 质粒 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂和试剂盒 | 第53-54页 |
| 1.3 抗体 | 第54页 |
| 1.4 Western Blot试验相关试剂 | 第54页 |
| 1.5 蛋白纯化相关试剂 | 第54-55页 |
| 1.6 主要仪器与耗材 | 第55页 |
| 1.7 Western Blot细相关试剂配制 | 第55页 |
| 2 方法 | 第55-60页 |
| 2.1 质粒小提 | 第55页 |
| 2.2 去内毒素质粒小提 | 第55-56页 |
| 2.3 DNA胶回收 | 第56页 |
| 2.4 质粒转化 | 第56页 |
| 2.5 免疫荧光染色 | 第56-57页 |
| 2.6 Western Blot试验 | 第57页 |
| 2.7 超声波破碎 | 第57页 |
| 2.8 载体构建 | 第57-59页 |
| 2.9 获得稳转细胞系 | 第59-60页 |
| 2.10 DsRED蛋白纯化 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-63页 |
| 3.1 获得猪源OSKML的DNA序列 | 第60页 |
| 3.2 获得稳定 293T细胞系 | 第60-61页 |
| 3.3 稳定细胞系免疫荧光染色 | 第61-62页 |
| 3.4 携带 9R穿膜肽的红色荧光蛋白的入核试验 | 第62页 |
| 3.5 DsRED-9R纯化及入核试验 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 4.1 获得猪源多能性转录因子 | 第63页 |
| 4.2 载体构建和获得稳转 293T细胞系 | 第63-64页 |
| 4.3 细胞穿膜肽（9R）携带DsRED的入核 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-81页 |
| 附录 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 个人简介 | 第86-88页 |
