| 目录 | 第1-6页 |
| 图表索引 | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一部分 肺癌抗体靶向治疗--肺癌功能性抗体及分子靶标的研究 | 第16-72页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 一、材料与方法 | 第19-40页 |
| (一) 实验材料 | 第19-25页 |
| 1. 细胞系 | 第19页 |
| 2. 组织标本 | 第19-20页 |
| 3. 动物 | 第20页 |
| 4. 主要试剂及耗材 | 第20-23页 |
| 5. 主要仪器 | 第23-24页 |
| 6. PCR引物 | 第24页 |
| 7. 分析软件 | 第24-25页 |
| (二) 实验方法 | 第25-40页 |
| 二、结果 | 第40-65页 |
| 1. 肺癌功能性单抗的筛选与鉴定 | 第40-45页 |
| ·肺癌功能性抗体库的制备与初筛 | 第40页 |
| ·功能性单克隆抗体23C2类和亚类的测定 | 第40页 |
| ·功能性单克隆抗体23C2所识别抗原在肺癌细胞中的表达 | 第40-42页 |
| ·细胞免疫荧光检测肺癌杂交瘤单抗23C2对人肺癌细胞系的识别 | 第40-42页 |
| ·细胞免疫荧光检测肺癌杂交瘤单抗23C2识别抗原的亚细胞定位 | 第42页 |
| ·功能性单克隆抗体23C2所识别抗原在肺癌组织中的表达 | 第42-44页 |
| ·功能性单克隆抗体23C2体内抑制肺癌移植瘤 | 第44-45页 |
| 2. 功能性单抗识别功能性抗原的分离鉴定 | 第45-53页 |
| ·功能性单抗的纯化 | 第46页 |
| ·优化与筛选提取单抗识别抗原的方法与功能性抗原的分子量鉴定 | 第46-47页 |
| ·亲和层析纯化抗原蛋白 | 第47-48页 |
| ·抗原蛋白的质谱分析鉴定 | 第48页 |
| ·单克隆抗体23C2抗原基因的鉴定 | 第48-53页 |
| ·基因敲降验证23C2抗原基因 | 第48-50页 |
| ·免疫共沉淀验证23C2抗原基因 | 第50页 |
| ·细胞免疫荧光共定位验证23C2抗原基因 | 第50-51页 |
| ·细胞免疫荧光验证23C2抗原基因 | 第51-53页 |
| 3. 商业化抗体检测MYH9在肺癌组织中的表达 | 第53-54页 |
| 4. 抗体体外处理体外功能的研究 | 第54-57页 |
| ·抗体体外处理后对肺癌细胞增殖的影响 | 第54页 |
| ·抗体体外处理后对肺癌细胞与基质粘附的影响 | 第54-55页 |
| ·抗体体外处理后对肺癌细胞侵袭的影响 | 第55页 |
| ·抗体体外处理后对肺癌细胞迁移的影响 | 第55-56页 |
| ·抗体体外处理后对肺癌细胞细胞周期的影响 | 第56-57页 |
| 5. siRNA瞬时敲降肺癌抗原的功能性基因对肺癌细胞体外功能的影响 | 第57-65页 |
| ·抗原基因敲降效率的检测 | 第57-58页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞增殖的影响 | 第58页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞与基质黏附的影响 | 第58-59页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞侵袭的影响 | 第59页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞迁移的影响 | 第59-60页 |
| ·划痕实验分析抗原基因敲降后对肺癌细胞迁移的影响 | 第60页 |
| ·Transwell分析抗原基因敲降后对肺癌细胞迁移的影响 | 第60页 |
| ·抗原基因敲降后对肺癌细胞细胞周期的影响 | 第60-61页 |
| ·抗原基因敲降后对细胞贴壁形态的影响 | 第61-63页 |
| ·抗原基因敲降后对细胞黏着斑蛋白和actin骨架蛋白的影响 | 第63-65页 |
| 三、讨论 | 第65-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 第二部分 抗CEA小分子抗体融合蛋白的构建与表达 | 第72-101页 |
| 前言 | 第72-74页 |
| 一、材料与方法 | 第74-84页 |
| (一) 实验材料 | 第74-76页 |
| 1. 细胞系 | 第74页 |
| 2. 菌株 | 第74页 |
| 3. 质粒 | 第74页 |
| 4. 主要试剂 | 第74-75页 |
| 5. 主要仪器 | 第75-76页 |
| 6. 克隆引物 | 第76页 |
| 7. 计算机分子软件 | 第76页 |
| (二) 实验方法 | 第76-84页 |
| 二、结果 | 第84-95页 |
| 1. Rch24F(ab')_2-LDP抗体融合蛋白重链基因Rch24F(ab')_2Fd-LDP真核高效表达载体的构建 | 第84-90页 |
| ·Rch24F(ab')_2Fd和LDP的扩增 | 第84-85页 |
| ·Rch24F(ab')_2Fd克隆载体的构建 | 第85-86页 |
| ·Rch24F(ab')_2Fd-LDP中间克隆载体的构建 | 第86-87页 |
| ·Rch24F(ab')_2Fd-LDP高效表达载体的构建 | 第87-88页 |
| ·pSRDC-Rch24F(ab')_2Fd-LDP高效表达载体的酶切鉴定和序列分析 | 第88-90页 |
| 2. 抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP在CHO细胞中的高效表达 | 第90-92页 |
| ·抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP高效真核表达载体转染CHO-dhfr~-细胞 | 第91页 |
| ·抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP在CHO细胞中的高效表达 | 第91-92页 |
| 3. 抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP分子量的鉴定 | 第92-93页 |
| 4. 抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP生物学活性的鉴定 | 第93-95页 |
| ·直接ELISA检测抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP与抗原结合的活性 | 第93页 |
| ·活细胞免疫荧光检测抗体融合蛋白Rch24F(ab')_2-LDP的结合活性 | 第93-95页 |
| 三、讨论 | 第95-100页 |
| 小结 | 第100-101页 |
| 文献综述 | 第101-115页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附录 | 第123-125页 |
| 个人简历 | 第125-126页 |
| 基金资助情况 | 第126-127页 |
