| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩写词表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 豆豉 | 第17-20页 |
| 1.1.1 豆豉的分布情况 | 第17页 |
| 1.1.2 豆豉的发酵工艺 | 第17-18页 |
| 1.1.3 豆豉发酵的微生物多样性 | 第18页 |
| 1.1.4 豆豉中的生理活性物质 | 第18-20页 |
| 1.2 乳酸菌及其主要生理功能 | 第20-21页 |
| 1.2.1 营养调节功能 | 第20页 |
| 1.2.2 肠道微生态调节功能 | 第20-21页 |
| 1.2.3 免疫调节功能 | 第21页 |
| 1.2.4 食物过敏调节功能 | 第21页 |
| 1.2.5 乳酸菌的其他生理机能 | 第21页 |
| 1.3 B-半乳糖苷酶的研究现状 | 第21-25页 |
| 1.3.1 β-半乳糖苷酶简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 β-半乳糖苷酶的生化性质 | 第22-23页 |
| 1.3.3 β-半乳糖苷酶来源 | 第23页 |
| 1.3.4 β-半乳糖苷酶应用 | 第23-25页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第25页 |
| 1.5 研究内容 | 第25-26页 |
| 1.6 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 高产β-半乳糖苷酶乳酸菌的分离筛选及鉴定 | 第27-41页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 不同地区豆豉样品采集一览 | 第27-28页 |
| 2.2.2 部分豆豉样品形态 | 第28页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.5 培养基及试剂配制 | 第29-31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.1 豉中乳酸菌分离 | 第31页 |
| 2.3.2 产β-半乳糖苷酶乳酸菌筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.3 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 高产β-半乳糖苷酶菌株的分子生物学鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3.5 两株短乳杆菌菌株的系统进化分析 | 第35-36页 |
| 2.4 结果 | 第36-38页 |
| 2.4.1 高产β-半乳糖苷酶乳酸菌的分离、筛选与酶活测定 | 第36-37页 |
| 2.4.2 分离得到乳酸菌的分子生物学鉴定 | 第37页 |
| 2.4.3 GJ1-3、GJ1-2系统进化分析 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 β-半乳糖苷酶基因的克隆与表达 | 第41-59页 |
| 3.1 引言 | 第41-42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-46页 |
| 3.2.1 实验菌株与载体 | 第42页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.3 实验用试剂 | 第43页 |
| 3.2.4 实验用培养基及试剂配制 | 第43-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-53页 |
| 3.3.1 β-半乳糖苷酶基因扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.2 β-半乳糖苷酶基因的克隆与核苷酸序列分析 | 第47-49页 |
| 3.3.3 阳性菌株重组质粒提取 | 第49-50页 |
| 3.3.4 重组质粒确认 | 第50页 |
| 3.3.5 酶切产物回收 | 第50页 |
| 3.3.6 β-半乳糖苷酶目的基因的重组表达载体构建 | 第50-51页 |
| 3.3.7 β-半乳糖苷酶重组菌株构建 | 第51页 |
| 3.3.8 阳性菌株筛选 | 第51页 |
| 3.3.9 重组质粒提取 | 第51-52页 |
| 3.3.10 转化感受态大肠杆菌BL21 | 第52页 |
| 3.3.11 阳性菌落筛选 | 第52页 |
| 3.3.12 β-半乳糖苷酶重组菌株的诱导表达 | 第52-53页 |
| 3.4 结果 | 第53-58页 |
| 3.4.1 GJ1-3来源β-半乳糖苷酶基因的克隆 | 第53-57页 |
| 3.4.2 短乳杆菌GJ1-3菌株由来β-半乳糖苷酶的基因表达 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58页 |
| 3.6 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 B-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学特性研究 | 第59-71页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.2.1 实验样品 | 第59页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第59-60页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第60页 |
| 4.2.4 实验用试剂配制 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 4.3.1 β-半乳糖苷酶重组菌株E.coli BL21/pET28a-bgaB-18的诱导表达 | 第61页 |
| 4.3.2 β-半乳糖苷酶重组菌株E.coli BL21/pET28a-bgaB-18蛋白纯化 | 第61-62页 |
| 4.3.3 重组β-半乳糖苷酶的SDS-PAGE电泳 | 第62页 |
| 4.3.4 重组β-半乳糖苷酶native-PAGE电泳 | 第62页 |
| 4.4 重组大肠杆菌B-半乳糖苷酶酶学性质 | 第62-64页 |
| 4.4.1 β-半乳糖苷酶的最适温度确定 | 第62-63页 |
| 4.4.2 β-半乳糖苷酶的最适pH确定 | 第63页 |
| 4.4.3 β-半乳糖苷酶的热稳定性测定 | 第63页 |
| 4.4.4 β-半乳糖苷酶的pH稳定性测定 | 第63-64页 |
| 4.4.5 金属离子对β-半乳糖苷酶活性的影响 | 第64页 |
| 4.4.6 β-半乳糖苷酶的Km与Vmax测定 | 第64页 |
| 4.5 结果 | 第64-69页 |
| 4.5.1 重组β-半乳糖苷酶SDS-PAGE电泳图谱 | 第64-65页 |
| 4.5.2 重组β-半乳糖苷酶native-PAGE电泳图谱 | 第65页 |
| 4.5.3 重组β-半乳糖苷酶最适反应温度 | 第65-66页 |
| 4.5.4 重组β-半乳糖苷酶最适pH | 第66页 |
| 4.5.5 重组β-半乳糖苷酶的热稳定性 | 第66-67页 |
| 4.5.6 β-半乳糖苷酶的pH稳定性 | 第67-68页 |
| 4.5.7 金属离子对重组β-半乳糖苷酶活性的影响 | 第68页 |
| 4.5.8 重组β-半乳糖苷酶的K_m与V_(max)测定 | 第68-69页 |
| 4.6 讨论 | 第69-70页 |
| 4.7 本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 β-半乳糖苷酶重组菌株培养条件探讨 | 第71-81页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料 | 第71-73页 |
| 5.2.1 实验样品 | 第71页 |
| 5.2.2 实验用培养基及试剂配制 | 第71-72页 |
| 5.2.3 实验试剂 | 第72页 |
| 5.2.4 培养基及试剂配制 | 第72-73页 |
| 5.3 试验方法 | 第73-74页 |
| 5.3.1 碳源对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第73页 |
| 5.3.2 氮源对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第73页 |
| 5.3.3 IPTG对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第73-74页 |
| 5.3.4 IPTG诱导时间对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第74页 |
| 5.3.5 振荡速度对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第74页 |
| 5.4 结果 | 第74-78页 |
| 5.4.1 碳源对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第74-75页 |
| 5.4.2 氮源对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第75-76页 |
| 5.4.3 IPTG浓度对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第76-77页 |
| 5.4.4 IPTG诱导时间对Lb.brevis GJ1-3由来β-半乳糖苷酶活性影响 | 第77页 |
| 5.4.5 振荡培养速度对Lb.brevis GJ1-3来源β-半乳糖苷酶产量的影响 | 第77-78页 |
| 5.5 讨论 | 第78页 |
| 5.6 本章小结 | 第78-81页 |
| 第六章 总结 | 第81-85页 |
| 6.1 传统发酵豆豉由来具有产B-半乳糖苷酶乳酸菌多样性 | 第81页 |
| 6.2 B-半乳糖苷酶产生菌筛选方法特点 | 第81页 |
| 6.3 LB.BREVIS GJ1-3由来B-半乳糖苷酶基因组及酶学特性 | 第81-82页 |
| 6.4 E.COLIBL21/PET28A-BGAB-18菌株B-半乳糖苷酶产酶条件 | 第82页 |
| 6.5 创新点 | 第82页 |
| 6.6 存在不足 | 第82-83页 |
| 6.7 展望 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第90页 |
