| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1. 引言 | 第11-23页 |
| 1.1 水稻齿叶矮缩病毒的研究进展 | 第11-16页 |
| 1.1.1 水稻齿叶矮缩病的发生和危害 | 第11-12页 |
| 1.1.2 水稻齿叶矮缩病的病害特征 | 第12页 |
| 1.1.3 RRSV的植物寄住与传播介体 | 第12-13页 |
| 1.1.4 RRSV的病原性质和分类地位 | 第13-14页 |
| 1.1.5 RRSV的基因组结构与功能 | 第14-16页 |
| 1.2 RRSV在介体褐飞虱体内的侵染循回机制 | 第16-17页 |
| 1.2.1 昆虫介体褐飞虱传播RRSV的类型 | 第16页 |
| 1.2.2 RRSV在褐飞虱体内的侵染循回过程 | 第16-17页 |
| 1.3 病毒在介体昆虫内复制机制的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 病毒在介体昆虫内扩散机制的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 利用来源于病毒基因组的dsRNA诱导RNAi的研究概况 | 第19-21页 |
| 1.5.1 抗病毒的RNAi机制 | 第19-20页 |
| 1.5.2 利用来源于病毒基因的dsRNA诱导RNAi的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.3 利用来源由于病毒dsRNA诱导RNAi的基因选择 | 第21页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2. 材料和方法 | 第23-32页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.1 材料来源 | 第23页 |
| 2.1.2 实验试剂与实验仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 体外合成源自于RRSV基因片段的dsRNA | 第25-27页 |
| 2.2.1.1 RRSV侵染的褐飞虱总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.1.2 RRSV基因片段cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增RRSV的基因片段 | 第25-26页 |
| 2.2.1.4 源自于RRSV基因片段的PCR产物测序 | 第26页 |
| 2.2.1.5 体外合成源白于RRSV基因片段的dsRNA | 第26-27页 |
| 2.2.2 体外合成的dsRNA饲喂褐飞虱 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 dsRNA人工饲料的配置 | 第27页 |
| 2.2.2.2 膜饲喂dsRNA | 第27-28页 |
| 2.2.3 RT-qPCR方法检测体外合成的dsRNA对RRSV侵染褐飞虱的影响 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 合成RT-qPCR方法检测所需的引物 | 第28页 |
| 2.2.3.2 目的基因和内参基因cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.2.3.3 合成引物的特异性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.4 目的基因和内参基因标准曲线的制定 | 第29页 |
| 2.2.3.5 RT-qPCR方法检测RNAi后目的基因的表达量 | 第29-30页 |
| 2.2.4 抗体与荧光素的交联 | 第30页 |
| 2.2.5 免疫荧光技术检测体外合成的dsRNA对RRSV在褐飞虱体内侵染的影响 | 第30-31页 |
| 2.2.6 Western blot方法检测体外合成的dsPns6干扰后RRSV编码蛋白在褐飞虱体内表达量的变化 | 第31-32页 |
| 2.2.6.1 RRSV侵染褐飞虱虫体蛋白的提取 | 第31页 |
| 2.2.6.2 Western blot方法检测 | 第31-32页 |
| 2.2.7 体外合成的dsPns6处理褐飞虱后的传毒效率检测 | 第32页 |
| 3. 结果与分析 | 第32-47页 |
| 3.1 体外合成RRSV基因片段的dsRNA | 第32-33页 |
| 3.1.1 获得扩增正确的RRSV基因片段 | 第32-33页 |
| 3.1.2 体外合成RRSV基因片段的dsRNA | 第33页 |
| 3.2 RT-qPCR方法检测体外合成的dsRNA对RRSV侵染褐飞虱的影响 | 第33-40页 |
| 3.2.1 RT-qPCR方法检测所需的引物特异 | 第33-35页 |
| 3.2.2 目的基因和内参基因扩增曲线和标准曲线的制定 | 第35-38页 |
| 3.2.3 RT-qPCR方法检测dsRNA干扰后RRSV在褐飞虱体内的病毒积累量 | 第38-40页 |
| 3.3 免疫荧光技术检测dsRNA处理后RRSV在褐飞虱体内的累积量 | 第40-44页 |
| 3.4 Western blot方法检测体外合成dsPns6对RRSV蛋白在褐飞虱体内的表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 体外合成的dsPns6处理褐飞虱后传毒效率的检测 | 第45-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 RRSV Pns6、P8、P9蛋白功能分析 | 第47-48页 |
| 4.2 dsPns6、dsP8、dsP9的干扰效果与其蛋白功能有关 | 第48-49页 |
| 4.3 探讨源自于RRSVPns6基因的dsRNA防控病害新途径 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
