| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 细胞色素P450酶系 | 第14-22页 |
| ·细胞色素P450 | 第15-16页 |
| ·NADPH-细胞色素P450还原酶 | 第16-22页 |
| ·CPR的发现 | 第16页 |
| ·CPR的结构 | 第16-19页 |
| ·CPR的功能 | 第19-20页 |
| ·CPR家族 | 第20-22页 |
| 2 RNA干扰技术在基因功能研究中的应用 | 第22-24页 |
| ·RNA干扰技术作用原理及作用方式 | 第22-23页 |
| ·RNA干扰技术的应用 | 第23-24页 |
| 3 异源表达系统在P450基因功能研究中的应用 | 第24-26页 |
| 4 本实验研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰 | 第28-66页 |
| 1 材料与方法 | 第29-39页 |
| ·供试昆虫 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第29-30页 |
| ·总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·总RNA检测 | 第30页 |
| ·第一条cDNA链的合成 | 第30页 |
| ·棉铃虫CPR基因cDNA片段扩增、克隆与测序 | 第30-31页 |
| ·引物设计及cDNA片段扩增 | 第30-31页 |
| ·产物纯化、克隆和测序 | 第31页 |
| ·CPR基因全长cDNA克隆 | 第31页 |
| ·序列分析及系统发育树的构建 | 第31-32页 |
| ·CPR基因在棉铃虫不同发育阶段及不同组织部位的表达分析 | 第32-33页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第32页 |
| ·实时荧光定量PCR反应扩增效率的测定 | 第32页 |
| ·CPR基因mRNA表达量比较 | 第32-33页 |
| ·RNAi介导的基因沉默对棉铃虫解毒代谢能力及生长发育的影响 | 第33-39页 |
| ·棉铃虫CPR基因特异性片段的克隆及dsRNA合成 | 第33-36页 |
| ·dsRNA喂食及注射剂量的确定 | 第36页 |
| ·dsRNA干扰时效的确定 | 第36页 |
| ·生物测定 | 第36页 |
| ·代谢酶活力测定 | 第36-38页 |
| ·生长发育情况观察 | 第38页 |
| ·RNA干扰效率检测 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-62页 |
| ·棉铃虫CPR基因cDNA片段克隆与序列分析 | 第39页 |
| ·棉铃虫CPR基因Ha_CPR全长cDNA的克隆与序列分析 | 第39-45页 |
| ·Ha_CPR基因全长cDNA的克隆 | 第39-40页 |
| ·Ha_CPR基因的系统进化分析 | 第40-45页 |
| ·PCR产物熔解曲线和实时荧光定量PCR扩增效率一致性分析 | 第45-46页 |
| ·Ha_CPR基因在棉铃虫不同发育阶段及不同组织部位的表达分析 | 第46-47页 |
| ·RNAi介导的Ha_CPR基因沉默对棉铃虫解毒代谢能力及生长发育的影响 | 第47-62页 |
| ·dsRNA喂食及注射剂量的确定 | 第47-49页 |
| ·dsRNA干扰时效的确定 | 第49页 |
| ·Ha_CPR基因沉默对拟除虫菊酯类杀虫剂毒力的影响 | 第49-56页 |
| ·Ha_CPR基因沉默对棉铃虫酶活性的影响 | 第56-58页 |
| ·Ha_CPR基因沉默对棉铃虫生长发育的影响 | 第58-62页 |
| 3 讨论 | 第62-66页 |
| ·NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)的结构与功能 | 第62页 |
| ·棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)的表达情况 | 第62-63页 |
| ·NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)与昆虫代谢抗性 | 第63-65页 |
| ·NADPH-细胞色素P450还原酶(CPR)与昆虫生长发育 | 第65-66页 |
| 全文总结与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 附录 | 第78-86页 |
| 1 材料与方法 | 第79-82页 |
| ·实验菌株、质粒及培养基 | 第79-80页 |
| ·菌株 | 第79页 |
| ·质粒 | 第79页 |
| ·培养基 | 第79-80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·表达载体的构建 | 第80页 |
| ·棉铃虫P450基因CYP6AE14、CYP6B7和CYP9A12在酵母中的表达 | 第80-81页 |
| ·转化酵母细胞 | 第80-81页 |
| ·半乳糖诱导的外源基因表达 | 第81页 |
| ·酵母细胞反应粗酶液的提取 | 第81页 |
| ·重组酵母细胞多功能氧化酶活性测定 | 第81-82页 |
| ·重组酵母细胞蛋白浓度标定 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-83页 |
| ·棉铃虫P450基因CYP6AE14、CYP6B7和CYP9A12在酵母中的表达 | 第82页 |
| ·重组酵母细胞多功能氧化酶活性测定 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-86页 |
| ·酵母表达系统 | 第83页 |
| ·细胞色素P450在昆虫解毒代谢中的作用 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
