摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
本论文常用英文缩写词 | 第8-14页 |
第一章 前言 | 第14-32页 |
1.1 研究背景 | 第14-32页 |
1.1.1 狂犬病病毒 | 第14-19页 |
1.1.2 细胞自噬 | 第19-27页 |
1.1.3 细胞凋亡 | 第27-30页 |
1.1.4 研究目的及意义 | 第30页 |
1.1.5 研究技术与路线 | 第30-32页 |
第二章 狂犬病病毒感染诱导SK和NA细胞自噬 | 第32-63页 |
2.1 引言 | 第32-33页 |
2.2 材料 | 第33-36页 |
2.2.1 质粒 | 第33页 |
2.2.2 病毒 | 第33页 |
2.2.3 酶、抗体及其他相关试剂 | 第33页 |
2.2.4 细菌及其培养相关试剂 | 第33-34页 |
2.2.5 细胞及其培养相关试剂 | 第34页 |
2.2.6 蛋白电泳相关试剂 | 第34-35页 |
2.2.7 主要仪器及耗材 | 第35-36页 |
2.3 方法 | 第36-42页 |
2.3.1 GD-SH-01 和HEP-Flury生长曲线的测定 | 第36-37页 |
2.3.2 自噬体的电子显微镜观察 | 第37页 |
2.3.3 激光共聚焦观察自噬体变化 | 第37-39页 |
2.3.4 免疫印迹检测自噬流相关蛋白 | 第39-42页 |
2.4 结果与分析 | 第42-59页 |
2.4.1 GD-SH-01 和HEP-Flury的生长曲线 | 第42-44页 |
2.4.2 RABV感染SK和NA细胞后自噬体的超微结构 | 第44-47页 |
2.4.3 RABV感染诱导SK和NA细胞自噬囊泡形成 | 第47-51页 |
2.4.4 RABV感染SK和NA细胞后自噬相关蛋白的变化 | 第51-53页 |
2.4.5 GD-SH-01 诱导SK细胞自噬流增强,而在NA细胞自噬流减弱 | 第53-57页 |
2.4.6 GD-SH-01 在SK细胞中自噬通路的检测 | 第57-59页 |
2.5 讨论 | 第59-61页 |
2.5.1 细胞的选择 | 第59页 |
2.5.2 野毒株诱导细胞自噬而弱毒不诱导细胞自噬 | 第59-60页 |
2.5.3 野毒株在两种神经母细胞瘤细胞内产生不同的自噬流趋势 | 第60-61页 |
2.5.4 自噬通路 | 第61页 |
2.6 小结 | 第61-63页 |
第三章 狂犬病病毒诱导的细胞自噬与凋亡的关系 | 第63-79页 |
3.1 引言 | 第63页 |
3.2 材料 | 第63-64页 |
3.2.1 细胞及其培养相关试剂 | 第63页 |
3.2.2 流式检测相关试剂、耗材及仪器 | 第63-64页 |
3.2.3 自噬检测相关试剂、耗材及仪器 | 第64页 |
3.2.4 其他仪器与耗材 | 第64页 |
3.3 方法 | 第64-67页 |
3.3.1 狂犬病病毒诱导细胞凋亡的检测 | 第64-65页 |
3.3.2 狂犬病病毒诱导细胞的线粒体膜电位检测 | 第65-66页 |
3.3.3 Rapamycin药物浓度的摸索 | 第66页 |
3.3.4 自噬增强组与无药物组狂犬病病毒诱导凋亡率检测 | 第66-67页 |
3.3.5 自噬增强组与无药物组狂犬病病毒滴度检测 | 第67页 |
3.4 结果与分析 | 第67-76页 |
3.4.1 狂犬病病毒诱导细胞凋亡 | 第67-71页 |
3.4.2 狂犬病病毒诱导细胞的膜电位变化 | 第71-72页 |
3.4.3 自噬增强组与无药物组狂犬病病毒诱导的凋亡率差异 | 第72-75页 |
3.4.4 自噬增强组与无药物组狂犬病病毒滴度 | 第75-76页 |
3.5 讨论 | 第76-78页 |
3.5.1 野毒株狂犬病病毒诱导较明显的凋亡 | 第76-77页 |
3.5.2 自噬和凋亡的关系 | 第77-78页 |
3.6 小结 | 第78-79页 |
第四章 GD-SH-01 M基因对自噬的影响 | 第79-103页 |
4.1 引言 | 第79页 |
4.2 材料 | 第79-81页 |
4.2.1 质粒 | 第79-80页 |
4.2.2 病毒及抗体 | 第80页 |
4.2.3 核酸纯化相关试剂 | 第80页 |
4.2.4 酶及其他相关试剂 | 第80-81页 |
4.2.5 细菌及其培养相关试剂 | 第81页 |
4.2.6 细胞及其培养相关试剂 | 第81页 |
4.2.7 要仪器及耗材 | 第81页 |
4.3 方法 | 第81-90页 |
4.3.1 重组狂犬病与亲本Hep-Flury和GD-SH-01 毒滴度的滴定 | 第81页 |
4.3.2 重组狂犬病病毒自噬检测 | 第81-82页 |
4.3.3 表达GD-SH-01 的N,P,M,G蛋白与m RFP蛋白偶联质粒的构建 | 第82-88页 |
4.3.4 狂犬病病毒细胞毒性的检测 | 第88页 |
4.3.5 狂犬病病毒g RNA和各结构蛋白m RNA水平的检测 | 第88-90页 |
4.4 结果与分析 | 第90-100页 |
4.4.1 重组狂犬病与亲本Hep-Flury和GD-SH-01 毒滴度的滴定 | 第90-92页 |
4.4.2 蛋白印迹检测重组狂犬病病毒自噬情况 | 第92页 |
4.4.3 GD-SH-01 的M基因促进狂犬病病毒诱导细胞凋亡 | 第92-94页 |
4.4.4 单个GD-SH-01 的结构蛋白与自噬的关系 | 第94-98页 |
4.4.5 狂犬病病毒基因复制和转录能力与自噬的关系 | 第98-100页 |
4.5 讨论 | 第100-102页 |
4.5.1 单个狂犬病病毒蛋白不能诱导自噬 | 第100-101页 |
4.5.2 狂犬病病毒M基因对自噬有促进作用 | 第101-102页 |
4.6 小结 | 第102-103页 |
第五章 全文总结 | 第103-105页 |
5.1 总结 | 第103-104页 |
5.2 创新点 | 第104页 |
5.3 下步计划 | 第104-105页 |
参考文献 | 第105-123页 |
附录 | 第123页 |