致谢 | 第6-7页 |
目录 | 第7-11页 |
中文摘要 | 第11-13页 |
第一篇 文献综述 | 第13-33页 |
第一章 水稻突变体库的构建 | 第13-14页 |
1.1 研究水稻突变体的重要性 | 第13-14页 |
1.2 水稻突变体库的构建策略及进展 | 第14页 |
第二章 转座子标签法克隆基因策略 | 第14-24页 |
2.1 转座子标签技术克隆基因的基本原理 | 第14-16页 |
2.2 转座子的类型 | 第16-17页 |
2.2.1 逆转座子 | 第16-17页 |
2.2.2 转座子 | 第17页 |
2.3 玉米转座子Ac/Ds | 第17-19页 |
2.3.1 Ac/Ds因子的结构 | 第17-18页 |
2.3.2 Ac/Ds的转座机制 | 第18-19页 |
2.4 转座子标签法克隆基因的策略 | 第19-23页 |
2.4.1 自主转座子标签法 | 第19-20页 |
2.4.2 非自主转座子标签法 | 第20-21页 |
2.4.3 转座子标签的进一步改良 | 第21-23页 |
2.5 转座子标签法分离基因的优势 | 第23-24页 |
2.6 异源植物转座子标签法克隆基因进展 | 第24页 |
第三章 农杆菌介导的水稻的遗传转化 | 第24-27页 |
3.1 转基因技术简介 | 第24-25页 |
3.2 农杆菌介导外源基因转化植物的机理 | 第25页 |
3.3 农杆菌介导的水稻遗传转化进展 | 第25-26页 |
3.4 农杆菌转化是构建水稻突变体库的首选方案 | 第26-27页 |
第四章 突变体的研究策略 | 第27-32页 |
4.1 插入突变的研究方法 | 第27-28页 |
4.2 非插入突变的研究方法 | 第28-32页 |
4.2.1 DNA分子标记技术 | 第28-31页 |
4.2.1.1 RFLP标记 | 第28-29页 |
4.2.1.2 RAPD标记 | 第29页 |
4.2.1.3 SSR标记 | 第29页 |
4.2.1.4 AFLP标记 | 第29-30页 |
4.2.1.5 STS和SCAR标记 | 第30-31页 |
4.2.1.7 SNP | 第31页 |
4.2.2 差异显示法 | 第31-32页 |
第五章 本研究目的和内容 | 第32-33页 |
第二篇 研究报告 | 第33-81页 |
第一章 农杆菌介导的转座子水稻突变体库的构建 | 第33-51页 |
1.2 方法 | 第34-38页 |
1.2.1 农杆菌介导Ac/Ds转化水稻 | 第34-35页 |
1.2.1.1 愈伤组织的诱导和继代培养 | 第34页 |
1.2.1.2 农杆菌的培养 | 第34-35页 |
1.2.1.3 抗性愈伤组织的获得 | 第35页 |
1.2.2 转Ds植株Basta抗性检测 | 第35-36页 |
1.2.3 转基因植株的分子鉴定 | 第36-38页 |
1.2.3.1 转基因植株的PCR扩增 | 第36页 |
1.2.3.2 转基因植株的Southern检测 | 第36-38页 |
1.3 结果与分析 | 第38-49页 |
1.3.1 转基因植株的获得 | 第38页 |
1.3.2 转基因植株的抗性分析 | 第38页 |
1.3.3 转基因植株的分子生物学检测结果 | 第38-49页 |
1.3.3.1 PCR检测结果 | 第38页 |
1.3.3.2 Southern检测结果 | 第38-49页 |
1.4 讨论 | 第49-51页 |
1.4.1 农杆菌介导的水稻遗传转化体系的完善 | 第49-50页 |
1.4.2 转化受体的选择 | 第50页 |
1.4.3 转基因植株的分子生物学检测分析 | 第50-51页 |
第二章 玉米转座子Ac/Ds在水稻转化群体中的活性检测及转座子插入位点旁侧序列的分析 | 第51-61页 |
2.1 材料 | 第52页 |
2.2 方法 | 第52-53页 |
2.2.1 DsDs纯合群体的构建 | 第52页 |
2.2.2 杂交群体的创建 | 第52页 |
2.2.3 Ds因子插入位点旁侧序列的分析 | 第52-53页 |
2.2.4 Ds在Ac/Ds杂交群体中转座活性的鉴定 | 第53页 |
2.3 结果与分析 | 第53-58页 |
2.3.1 Ds因子转座频率的分子生物学分析 | 第53-55页 |
2.3.2 Ds因子插入位点旁侧序列的分析 | 第55-58页 |
2.4 讨论 | 第58-61页 |
2.4.1 快速筛选Ds因子发生转座的杂交植株 | 第58-59页 |
2.4.2 辅助群体的构建 | 第59页 |
2.4.3 高效表达载体的构建 | 第59-61页 |
第三章 几种重要突变体的遗传分析 | 第61-79页 |
3.1 材料 | 第61页 |
3.2 方法 | 第61-64页 |
3.2.1 突变体的形态观测 | 第61-62页 |
3.2.2 矮杆突变体与雄性不育突变体的RAPD分析 | 第62页 |
3.2.3 矮杆突变体与雄性不育突变体的AFLP分析 | 第62-64页 |
3.3 结果与分析 | 第64-72页 |
3.3.1 突变体的形态统计与分析 | 第64-70页 |
3.3.1.1 矮秆突变体的形态观测与分析 | 第65-66页 |
3.3.1.2 矮秆突变体对赤霉素GA3的反应 | 第66页 |
3.3.1.3 雄性不育突变体的形态观测与分析 | 第66页 |
3.3.1.4 抗纹枯病的矮秆突变体 | 第66-70页 |
3.3.2 分子生物学检测结果 | 第70-72页 |
3.3.2.1 157矮秆变异植株的RAPD检测 | 第70页 |
3.3.2.2 380b雄性不育变异植株的RAPD检测 | 第70-71页 |
3.3.2.3 矮秆突变体的AFLP标记研究结果 | 第71-72页 |
3.3.2.4 雄性不育突变体的AFLP标记研究结果 | 第72页 |
3.4 讨论 | 第72-79页 |
3.4.1 插入突变的形态判断 | 第74-76页 |
3.4.2 非插入突变的分析 | 第76-77页 |
3.4.3 RAPD标记研究在转基因水稻突变体研究中的作用 | 第77页 |
3.4.4 转基因水稻AFLP标记研究体系的完善 | 第77-79页 |
第四章 需要进一步解决的问题 | 第79-80页 |
结论 | 第80-81页 |
参考文献 | 第81-91页 |
附录A 质粒图谱 | 第91-92页 |
附录B 主要培养基配方 | 第92-94页 |
附录C 缩略词表 | 第94-95页 |
附录D 攻读博士学位期间发表的文章 | 第95-96页 |
英文摘要 | 第96页 |