| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 植物与病原菌互作的分子机制 | 第12-14页 |
| 1.2 植物R基因对效应蛋白的识别作用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 经典受体-配体模式 | 第14页 |
| 1.2.2 警戒假说 | 第14-15页 |
| 1.2.3 诱饵假说 | 第15-16页 |
| 1.3 植物病原卵菌效应蛋白 | 第16-22页 |
| 1.3.1 质外体效应蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.2 细胞质效应蛋白 | 第17-22页 |
| 1.4 葡萄霜霉病研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4.1 葡萄霜霉病的起源、分布及危害 | 第22-23页 |
| 1.4.2 葡萄霜霉菌形态特征及致病过程 | 第23页 |
| 1.4.3 葡萄霜霉菌RxLR类效应蛋白 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 葡萄霜霉菌RxLR类效应因子筛选 | 第25-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料与菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 主要酶及试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.5 供试引物 | 第26-27页 |
| 2.1.6 葡萄霜霉菌RxLR效应因子基因预测序列 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 植物材料培养 | 第27页 |
| 2.2.2 葡萄霜霉菌活化、扩繁及保存 | 第27-28页 |
| 2.2.3 葡萄霜霉菌RNA提取 | 第28页 |
| 2.2.4 第一条链cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.5 实时荧光定量RT-PCR分析 | 第29页 |
| 2.2.6 葡萄霜霉菌RxLR效应因子克隆 | 第29-31页 |
| 2.2.7 葡萄霜霉菌RxLR效应因子载体构建 | 第31-33页 |
| 2.2.8 农杆菌电击感受态的制备及转化 | 第33-34页 |
| 2.2.9 葡萄霜霉菌RxLR效应因子亚细胞定位分析 | 第34页 |
| 2.2.10 葡萄霜霉菌RxLR效应因子抑制PCD的功能分析 | 第34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-41页 |
| 2.3.1 葡萄霜霉菌RxLR效应因子基因序列特征 | 第34-38页 |
| 2.3.2 葡萄霜霉菌RxLR效应因子侵染寄主的表达模式 | 第38-39页 |
| 2.3.3 葡萄霜霉菌RxLR效应因子在本氏烟中亚细胞定位 | 第39页 |
| 2.3.4 葡萄霜霉菌RxLR效应因子抑制本氏烟程序性细胞死亡分析 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 葡萄霜霉菌效应因子PvRxLR28抑制植物免疫功能分析 | 第43-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 植物材料与菌株 | 第43页 |
| 3.1.2 供试质粒 | 第43页 |
| 3.1.3 主要酶及试剂 | 第43-45页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第45页 |
| 3.1.5 供试引物 | 第45页 |
| 3.2 方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 植物材料培养 | 第45页 |
| 3.2.2 葡萄霜霉菌活化、扩繁及保存 | 第45-46页 |
| 3.2.3 本氏烟RNA提取 | 第46页 |
| 3.2.4 第一条链cDNA的合成 | 第46页 |
| 3.2.5 实时荧光定量RT-PCR分析 | 第46页 |
| 3.2.6 PvRxLR28效应因子载体构建 | 第46-47页 |
| 3.2.7 农杆菌电击感受态的制备及转化 | 第47页 |
| 3.2.8 葡萄霜霉菌RxLR效应因子亚细胞定位分析 | 第47页 |
| 3.2.9 葡萄霜霉菌RxLR效应因子抑制PCD的功能分析 | 第47页 |
| 3.2.10 葡萄叶片瞬时转化及接种霜霉菌 | 第47-48页 |
| 3.2.11 本氏烟稳定转化 | 第48页 |
| 3.2.12 本氏烟DNA粗提方法 | 第48-49页 |
| 3.2.13 本氏烟接种烟草疫霉菌 | 第49页 |
| 3.2.14 过氧化氢的检测 | 第49页 |
| 3.2.15 Western Blot分析 | 第49-51页 |
| 3.3 实验结果 | 第51-57页 |
| 3.3.1 PvRxLR28的功能依赖于细胞核定位和C端序列 | 第51-52页 |
| 3.3.2 PvRxLR28提高植物感病性 | 第52-56页 |
| 3.3.3 PvRxLR28抑制植物过氧化氢的积累和抗病相关基因表达 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 葡萄霜霉菌效应因子PvRxLR16激发植物防御反应分析 | 第59-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 4.1.1 植物材料与菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 供试质粒 | 第59页 |
| 4.1.3 主要酶及试剂 | 第59-60页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第60-61页 |
| 4.1.5 供试引物 | 第61页 |
| 4.2 方法 | 第61-67页 |
| 4.2.1 植物材料培养 | 第61页 |
| 4.2.2 葡萄霜霉菌活化、扩繁及保存 | 第61页 |
| 4.2.3 本氏烟RNA提取 | 第61页 |
| 4.2.4 第一条链cDNA的合成 | 第61-62页 |
| 4.2.5 实时荧光定量RT-PCR分析 | 第62页 |
| 4.2.6 载体构建 | 第62-63页 |
| 4.2.7 农杆菌电击感受态的制备及转化 | 第63页 |
| 4.2.8 葡萄霜霉菌RxLR效应因子亚细胞定位分析 | 第63页 |
| 4.2.9 葡萄霜霉菌RxLR效应因子抑制PCD的功能分析 | 第63页 |
| 4.2.10 本氏烟接种辣椒疫霉菌 | 第63页 |
| 4.2.11 过氧化氢的检测 | 第63-64页 |
| 4.2.12 Western Blot分析 | 第64页 |
| 4.2.13 基因枪轰击洋葱表皮细胞 | 第64页 |
| 4.2.14 拟南芥原生质体转化 | 第64-66页 |
| 4.2.15 本氏烟中病毒介导基因沉默(VIGS)方法 | 第66页 |
| 4.2.16 本氏烟叶片离子渗漏测定 | 第66页 |
| 4.2.17 本氏烟叶片台盼蓝染色 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-78页 |
| 4.3.1 PvRxLR16引起本氏烟叶片细胞死亡 | 第67-68页 |
| 4.3.2 PvRxLR16在植物中的亚细胞定位分析 | 第68-69页 |
| 4.3.3 PvRxLR16关键功能域分析 | 第69-70页 |
| 4.3.4 PvRxLR16预测糖基化位点分析 | 第70-71页 |
| 4.3.5 PvRxLR16引起细胞死亡依赖于HSP90、SGT1和RAR1,不依赖于SERK3 | 第71-72页 |
| 4.3.6 PvRxLR16引起细胞死亡信号通路分析 | 第72-74页 |
| 4.3.7 PvRxLR16能激发本氏烟抗病防御反应 | 第74-76页 |
| 4.3.8 其他PvRxLRs能够抑制PvRxLR16激发的免疫反应 | 第76-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 葡萄霜霉菌效应因子PvRxLR16寄主靶蛋白筛选 | 第80-101页 |
| 5.1 实验材料 | 第80-82页 |
| 5.1.1 植物材料与菌株 | 第80页 |
| 5.1.2 供试质粒 | 第80页 |
| 5.1.3 主要酶及试剂 | 第80-81页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第81-82页 |
| 5.1.5 供试引物 | 第82页 |
| 5.2 方法 | 第82-90页 |
| 5.2.1 植物材料培养 | 第82页 |
| 5.2.2 葡萄霜霉菌活化、扩繁及保存 | 第82页 |
| 5.2.3 葡萄叶片RNA提取 | 第82页 |
| 5.2.4 第一条链cDNA的合成 | 第82页 |
| 5.2.5 实时荧光定量RT-PCR分析 | 第82页 |
| 5.2.6 葡萄cDNA酵母文库构建 | 第82-85页 |
| 5.2.7 载体构建 | 第85-86页 |
| 5.2.8 农杆菌电击感受态的制备及转化 | 第86页 |
| 5.2.9 VaCUE蛋白亚细胞定位分析 | 第86页 |
| 5.2.10 酵母双杂交筛选PvRxLR16在葡萄内的靶蛋白 | 第86-88页 |
| 5.2.11 双分子荧光互补(BiFC)验证蛋白互作 | 第88-89页 |
| 5.2.12 Co-IP验证蛋白互作 | 第89页 |
| 5.2.13 拟南芥稳定转化及筛选 | 第89-90页 |
| 5.2.14 本氏烟中病毒介导基因沉默(VIGS)方法 | 第90页 |
| 5.2.15 Western Blot分析 | 第90页 |
| 5.3 实验结果 | 第90-99页 |
| 5.3.1 葡萄cDNA酵母双杂交文库构建分析 | 第90-91页 |
| 5.3.2 酵母双杂交筛选PvRxLR16的寄主靶蛋白 | 第91-93页 |
| 5.3.3 BiFC和Co-IP验证PvRxLR16与VaCUE蛋白互作 | 第93-94页 |
| 5.3.4 PvRxLR16与VaCUE蛋白互作关键结构域分析 | 第94-96页 |
| 5.3.5 BiFC验证PvRxLR16与NbCUE、AtCUE蛋白互作 | 第96-97页 |
| 5.3.6 VaCUE表达模式和亚细胞定位分析 | 第97-98页 |
| 5.3.7 CUE蛋白不参与PvRxLR16引起的细胞坏死反应 | 第98页 |
| 5.3.8 VaCUE基因稳定转化拟南芥 | 第98-99页 |
| 5.4 讨论 | 第99-101页 |
| 第六章 结论和展望 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-114页 |
| 附录 | 第114-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 作者简介 | 第126页 |
