| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 IB的流行病学 | 第10页 |
| 1.1.2 IB的临床症状 | 第10-11页 |
| 1.1.3 IB的发病机制 | 第11页 |
| 1.1.4 IB的病原学 | 第11-14页 |
| 1.1.5 IB的防治 | 第14页 |
| 1.2 氨肽酶N研究概述 | 第14-15页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、毒株和细胞系 | 第16页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第16页 |
| 2.1.3 主要工具酶、试剂盒和抗体 | 第16页 |
| 2.1.4 主要生化试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-28页 |
| 2.2.1 重组质粒p ET30a-c APN的构建 | 第17-20页 |
| 2.2.2 重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2.3 重组质粒p ET30a-c APN的诱导表达 | 第21-23页 |
| 2.2.4 重组蛋白的纯化及复性 | 第23页 |
| 2.2.5 鸡氨肽酶N多克隆抗体的制备与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.6 稳定表达细胞系的建立 | 第24-27页 |
| 2.2.7 稳定表达细胞系的检测 | 第27页 |
| 2.2.8 病毒感染实验 | 第27页 |
| 2.2.9 病毒检测 | 第27-28页 |
| 3 结果 | 第28-36页 |
| 3.1 重组质粒p ET30a-c APN的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.1 重组质粒p ET30a-c APN的PCR鉴定 | 第28页 |
| 3.1.2 重组质粒p ET30a-c APN的双酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 3.2 重组蛋白的表达及纯化复性 | 第29-30页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 3.2.2 重组蛋白的纯化与复性 | 第30页 |
| 3.3 鸡氨肽酶N多克隆抗体效价检测 | 第30-31页 |
| 3.4 IBV非易感细胞系的鉴定 | 第31页 |
| 3.5 转染细胞免疫荧光检测 | 第31-32页 |
| 3.6 MDCK细胞的G418最适工作浓度的确定 | 第32页 |
| 3.7 稳定表达c APN的MDCK单克隆细胞系的筛选及鉴定 | 第32-34页 |
| 3.7.1 稳定表达c APN的MDCK单克隆细胞系的筛选 | 第32页 |
| 3.7.2 稳定表达细胞系MDCK-c APN的RT-PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 3.7.3 稳定表达细胞系MDCK-c APN的间接免疫荧光鉴定 | 第33-34页 |
| 3.8 病毒感染实验 | 第34页 |
| 3.9 病毒感染后RT-PCR检测 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 4.1 重组c APN蛋白的表达及其纯化和复性 | 第36页 |
| 4.2 稳定表达c APN蛋白的MDCK细胞系的筛选 | 第36-37页 |
| 4.3 鸡APN的生物学功能及其在IBV感染中的作用 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第45页 |
