| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 鸡毒支原体病原学简介 | 第12页 |
| 1.1.2 鸡毒支原体病的临床和病理症状 | 第12-13页 |
| 1.1.3 鸡毒支原体流行病学 | 第13页 |
| 1.1.4 鸡毒支原体的致病机理 | 第13页 |
| 1.1.5 鸡毒支原体病的诊断 | 第13-14页 |
| 1.1.6 鸡毒支原体病预防和治疗 | 第14-16页 |
| 1.2 支原体粘附因子概述 | 第16页 |
| 1.3 支原体脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins，LAMPs)诱导机体免疫应答的研究 | 第16-17页 |
| 1.4 热休克蛋白概述 | 第17-19页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 热休克蛋白GrpE的原核表达及鉴定 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要设备和仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 鸡毒支原体R株培养及基因组的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 鸡毒支原体R株膜蛋白的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 鸡毒支原体R株GrpE基因克隆 | 第22页 |
| 2.2.4 pET-28a-GrpE重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 GrpE基因的原核表达 | 第23页 |
| 2.2.6 重组蛋白GrpE诱导条件的选择和纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.7 重组蛋白GrpE Western blot鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 GrpE在鸡毒支原体中的定位 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 GrpE基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.2 重组质粒PET-28a-GrpE PCR和双酶切鉴定 | 第25页 |
| 2.3.3 重组蛋白GrpE的原核表达和纯化 | 第25-26页 |
| 2.3.4 rGrpE western blot鉴定 | 第26页 |
| 2.3.5 GrpE在鸡毒支原体中的亚细胞定位 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27页 |
| 2.5 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 rGrpE粘附特性研究 | 第28-37页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 血清 | 第28页 |
| 3.1.2 细胞 | 第28页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 主要设备 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 流式细胞术检测rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 的粘附 | 第28-29页 |
| 3.2.2 流式细胞术检测鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制LAMPs对DF-1 细胞的粘附 | 第29页 |
| 3.2.3 夹心ELISA检测鸡毒支原体rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 细胞的粘附 | 第29页 |
| 3.2.4 夹心ELISA检测鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制鸡毒支原体LAMPs对DF-1 细胞的粘附 | 第29页 |
| 3.2.5 激光共聚焦显微镜观察rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 细胞粘附 | 第29-30页 |
| 3.2.6 激光共聚焦显微镜观察鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制鸡毒支原体LAMPs对DF-1 细胞粘附 | 第30页 |
| 3.3 结果 | 第30-35页 |
| 3.3.1 流式细胞术检测rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 的粘附 | 第30-31页 |
| 3.3.2 流式细胞术检测鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制LAMPs对DF-1 的粘附 | 第31页 |
| 3.3.3 夹心ELISA检测rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 细胞粘附 | 第31-32页 |
| 3.3.4 夹心ELISA检测鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制鸡毒支原体LAMPs对DF-1 细胞粘附 | 第32-33页 |
| 3.3.5 激光共聚焦观察rGrpE粘附DF-1 细胞及鸡毒支原体阳性血清抑制rGrpE对DF-1 细胞粘附 | 第33-34页 |
| 3.3.6 激光共聚焦观察鸡毒支原体LAMPs粘附DF-1 细胞及rGrpE MAb抑制鸡毒支原体LAMPs对DF-1 细胞粘附 | 第34-35页 |
| 3.4 小结 | 第35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 rGrpE诱导DF-1 细胞释放IL-1β的机制研究 | 第37-47页 |
| 4.1 材料 | 第37页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 主要设备 | 第37页 |
| 4.2 方法 | 第37-41页 |
| 4.2.1 鸡毒支原体LAMPs的提取 | 第37-38页 |
| 4.2.2 RNA提取 | 第38页 |
| 4.2.3 反转录步骤 | 第38页 |
| 4.2.4 质粒转染 | 第38-39页 |
| 4.2.5 SYBR Green I Real-time PCR相关引物序列 | 第39页 |
| 4.2.6 SYBR Green I Real-time PCR体系 | 第39页 |
| 4.2.7 SYBR Green I Real-time PCR检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导IL-1β释放的最佳时间和最佳剂量 | 第39-40页 |
| 4.2.8 ELISA检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导IL-1β释放的最佳时间和最佳剂量 | 第40页 |
| 4.2.9 Western Blot检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导p65磷酸化 | 第40页 |
| 4.2.10 激光共聚焦扫描显微镜检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导p65入核 | 第40-41页 |
| 4.2.11 抑制NF-κB活性后SYBR Green I Real-time PCR检测rGrpE刺激DF-1 细胞后诱导IL-1β的表达情况。 | 第41页 |
| 4.2.12 抑制NF-κB活性后ELISA检测rGrp E刺激DF-1 细胞后诱导IL-1β的表达情况。 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-45页 |
| 4.3.1 SYBR Green I Real-time PCR检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导IL-1β释放的最佳时间和最佳剂量 | 第41-42页 |
| 4.3.2 ELISA检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导IL-1β释放的最佳时间和最佳剂量 | 第42-43页 |
| 4.3.3 Western Blot检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导p65磷酸化 | 第43页 |
| 4.3.4 激光共聚焦扫描显微镜检测rGrpE刺激DF-1 细胞诱导p65入核 | 第43-44页 |
| 4.3.5 抑制NF-κB活性后SYBR Green I Real-time PCR检测rGrpE刺激DF-1 细胞后诱导IL-1β的表达情况 | 第44-45页 |
| 4.3.6 抑制NF-κB活性后ELISA检测rGrpE刺激DF-1 细胞后诱导IL-1β的表达情况 | 第45页 |
| 4.4 小结 | 第45-46页 |
| 4.5 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
