| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词表（Abbreviations） | 第10-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-30页 |
| 1.1 鸡卵泡的生长发育 | 第17-23页 |
| 1.1.1 鸡卵巢、卵泡的生长发育模式 | 第17-18页 |
| 1.1.2 鸡卵泡的结构 | 第18页 |
| 1.1.3 鸡卵泡中颗粒细胞、卵母细胞和膜细胞的作用 | 第18-19页 |
| 1.1.4 鸡卵泡发育成熟过程中相关生物学重要标志物 | 第19-20页 |
| 1.1.5 调节鸡卵泡发育成熟的调控因子及信号通路 | 第20-23页 |
| 1.2 SLIT/ROBO通路 | 第23-27页 |
| 1.2.1 SLIT/ROBO通路中各成员的结构与类型 | 第23-24页 |
| 1.2.2 SLIT/ROBO通路转导途径/机制 | 第24-25页 |
| 1.2.3 SLIT/ROBO通路介导的细胞功能 | 第25-26页 |
| 1.2.4 SLIT2和SLIT3分子调控鸡卵泡生长发育的研究进展进展 | 第26-27页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第27页 |
| 1.4 研究方案及方法 | 第27-30页 |
| 第二篇 研究内容 | 第30-110页 |
| 第一章 鸡SLIT/ROBO通路配体和受体基因mRNA在卵巢中的时空表达模式 | 第30-39页 |
| 引言 | 第30页 |
| 1.1 实验材料 | 第30-33页 |
| 1.1.1 研究对象 | 第30-31页 |
| 1.1.2 原位杂交实验相关试剂 | 第31-32页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第32页 |
| 1.1.4 相关溶液配制 | 第32-33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-34页 |
| 1.2.1 动物模型的建立 | 第33页 |
| 1.2.2 组织取样及保存 | 第33页 |
| 1.2.3 原位杂交探针的制备及合成 | 第33-34页 |
| 1.2.4 原位杂交 | 第34页 |
| 1.3 结果 | 第34-37页 |
| 1.3.1 SLITs （SLIT1、SLIT2、SLIT3）基因mRNA在前等级卵泡中的表达定位 | 第34-36页 |
| 1.3.2 ROBOs（ROBO1、ROBO2、ROBO3、ROBO4）基因mRNA在前等级卵泡中的表达定位 | 第36-37页 |
| 1.4 讨论 | 第37-38页 |
| 1.5 小结 | 第38-39页 |
| 第二章 鸡SLIT/ROBO通路配体和受体蛋白质分子在卵巢中的时空表达模式 | 第39-47页 |
| 引言 | 第39页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第39-40页 |
| 2.1.2 免疫组化实验相关试剂 | 第40页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第40页 |
| 2.1.4 相关溶液配制 | 第40-41页 |
| 2.1.5 抗体 | 第41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 2.2.1 动物模型的建立 | 第41页 |
| 2.2.2 组织取样及保存 | 第41页 |
| 2.2.3 免疫组化 | 第41-42页 |
| 2.3 结果 | 第42-45页 |
| 2.3.1 SLITs （SLIT1、SLIT2、SLIT3）蛋白在前等级卵泡中的表达定位 | 第42-43页 |
| 2.3.2 ROBOs（ROBO1、ROBO2、ROBO3、ROBO4）蛋白在前等级卵泡中的表达定位 | 第43-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 SLIT2和SLIT3分子与受体ROBO1和ROBO2之间互作关系的检测 | 第47-73页 |
| 引言 | 第47页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第47-48页 |
| 3.1.2 相关试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第49页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第49-50页 |
| 3.1.5 抗体 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-61页 |
| 3.2.1 鸡前等级卵泡原代颗粒细胞的分离培养 | 第50页 |
| 3.2.2 基因合成 | 第50-51页 |
| 3.2.3 采用亚克隆的方法构建表达载体 | 第51-56页 |
| 3.2.4 超表达转染及验证 | 第56-59页 |
| 3.2.5 配体与受体互作关系的检测 | 第59-61页 |
| 3.3 结果 | 第61-71页 |
| 3.3.1 鸡前等级卵泡颗粒细胞的分离培养 | 第61-62页 |
| 3.3.2 基因合成 | 第62页 |
| 3.3.3 超表达载体的构建 | 第62-65页 |
| 3.3.4 超表达转染 | 第65-70页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀结果 | 第70-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-72页 |
| 3.5 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 SLIT2和SLIT3分子超表达对前等级卵泡生长发育的抑制作用 | 第73-94页 |
| 引言 | 第73页 |
| 4.1 实验材料 | 第73-76页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第73-74页 |
| 4.1.2 相关试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第75-76页 |
| 4.1.4 抗体 | 第76页 |
| 4.2 实验方法 | 第76-80页 |
| 4.2.1 鸡前等级卵泡原代颗粒细胞分离培养 | 第76-77页 |
| 4.2.2 超表达载体的构建 | 第77页 |
| 4.2.3 超表达转染与验证 | 第77页 |
| 4.2.4 ROBO1和ROBO2基因mRNA表达量测定 | 第77-78页 |
| 4.2.5 ROBO1和ROBO2蛋白表达量测定 | 第78页 |
| 4.2.6 FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA表达量测定 | 第78-79页 |
| 4.2.7 EDU试剂盒检测前等级卵泡颗粒细胞增殖 | 第79-80页 |
| 4.2.8 数据处理 | 第80页 |
| 4.3 结果 | 第80-92页 |
| 4.3.1 鸡前等级卵泡颗粒细胞原代分离培养 | 第80页 |
| 4.3.2 超表达载体的构建 | 第80页 |
| 4.3.3 超表达转染与验证 | 第80-82页 |
| 4.3.4 ROBO1和ROBO2基因的溶解曲线和扩增曲线 | 第82页 |
| 4.3.5 SLIT2基因mRNA超表达后促进ROBO1和ROBO2基因mRNA的表达 | 第82-83页 |
| 4.3.6 SLIT3基因mRNA超表达后促进ROBO1和ROBO2基因mRNA的表达 | 第83-84页 |
| 4.3.7 SLIT2和SLIT3基因mRNA超表达后促进受体ROBO1和ROBO2蛋白的表达 | 第84-86页 |
| 4.3.8 FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因的溶解曲线和扩增曲线 | 第86页 |
| 4.3.9 SLIT2基因mRNA超表达后抑制FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA的表达 | 第86-88页 |
| 4.3.10 SLIT3基因mRNA超表达后抑制FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA的表达 | 第88-89页 |
| 4.3.11 SLIT2和SLIT3基因mRNA超表达后抑制前等级卵泡颗粒细胞增殖 | 第89-92页 |
| 4.4 讨论 | 第92-93页 |
| 4.5 小结 | 第93-94页 |
| 第五章 SLIT2和SLIT3分子抑制前等级卵泡生长发育作用的鉴定 | 第94-110页 |
| 引言 | 第94页 |
| 5.1 实验材料 | 第94-95页 |
| 5.1.1 研究对象 | 第94页 |
| 5.1.2 相关试剂 | 第94页 |
| 5.1.3 主要仪器及耗材 | 第94-95页 |
| 5.1.4 抗体 | 第95页 |
| 5.2 实验方法 | 第95-97页 |
| 5.2.1 鸡前等级卵泡原代颗粒细胞原代分离培养 | 第95页 |
| 5.2.2 siRNA特异性干扰片段的制备 | 第95-96页 |
| 5.2.3 siRNA特异性干扰片段的转染与筛选 | 第96页 |
| 5.2.4 ROBO1和ROBO2基因mRNA表达量的测定 | 第96-97页 |
| 5.2.5 ROBO1和ROBO2蛋白表达量的测定 | 第97页 |
| 5.2.6 FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA的表达量的测定 | 第97页 |
| 5.2.7 EDU试剂盒检测颗粒细胞增殖 | 第97页 |
| 5.2.8 数据处理 | 第97页 |
| 5.3 结果 | 第97-108页 |
| 5.3.1 鸡前等级卵泡颗粒细胞原代分离培养 | 第97页 |
| 5.3.2 siRNA特异性干扰片段的筛选 | 第97-98页 |
| 5.3.3 ROBO1和ROBO2基因的溶解曲线和扩增曲线 | 第98页 |
| 5.3.4 siRNA干扰SLIT2分子后抑制ROBO1和ROBO2基因mRNA的表达 | 第98-99页 |
| 5.3.5 siRNA干扰SLIT3分子后抑制ROBO1和ROBO2基因mRNA的表达 | 第99-101页 |
| 5.3.6 siRNA干扰SLIT2和SLIT3分子后抑制受体ROBO1和ROBO2蛋白的表达 | 第101-102页 |
| 5.3.7 FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因的溶解曲线和扩增曲线 | 第102-103页 |
| 5.3.8 siRNA干扰SLIT2分子后促进FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA的表达 | 第103-104页 |
| 5.3.9 siRNA干扰SLIT3分子后促进FSHR、STAR、GDF9、CYP11A1基因mRNA的表达 | 第104-106页 |
| 5.3.10 siRNA干扰SLIT2和SLIT3分子后促进前等级卵泡颗粒细胞增殖 | 第106-108页 |
| 5.4 讨论 | 第108-109页 |
| 5.5 小结 | 第109-110页 |
| 结论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-123页 |
| 附录 | 第123-142页 |
| 作者简介 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
