英文缩写说明 | 第5-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
第1章 绪论 | 第16-26页 |
1.1 miRNA的研究 | 第16-21页 |
1.1.1 miRNA的发现 | 第16页 |
1.1.2 miRNA的产生过程 | 第16-17页 |
1.1.3 miRNA的作用机制 | 第17-18页 |
1.1.4 miRNA的检测手段 | 第18-19页 |
1.1.5 miRNA的生物学功能 | 第19-20页 |
1.1.6 miRNA与RNAi | 第20-21页 |
1.2 miRNA与家蚕 | 第21-23页 |
1.2.1 家蚕miRNA研究进展 | 第21-22页 |
1.2.2 家蚕病毒miRNA研究进展 | 第22-23页 |
1.3 miRNA与昆虫免疫 | 第23页 |
1.4 本课题研究目的及意义 | 第23-24页 |
1.5 本课题主要研究内容与研究方法 | 第24-26页 |
1.5.1 主要研究内容 | 第24-25页 |
1.5.2 实验技术路线 | 第25-26页 |
第2章 Novel-31*及溶血素基因在家蚕血淋巴及中肠组织表达的定量分析 | 第26-36页 |
2.1 引言 | 第26页 |
2.2 实验材料与试剂 | 第26-28页 |
2.2.1 主要实验材料及试剂 | 第26页 |
2.2.2 主要实验仪器及设备 | 第26-27页 |
2.2.3 主要试剂的配置 | 第27-28页 |
2.2.4 常用生物信息学软件 | 第28页 |
2.3 实验方法 | 第28-31页 |
2.3.1 生物信息学预测靶基因 | 第28页 |
2.3.2 病原接种 | 第28页 |
2.3.3 组织收集 | 第28-29页 |
2.3.4 总RNA及Small RNA提取 | 第29页 |
2.3.5 反转录反应 | 第29-30页 |
2.3.6 实时荧光定量PCR检测Novel-31*及溶血素基因表达变化 | 第30-31页 |
2.4 结果与分析 | 第31-33页 |
2.4.1 Novel-31*二级结构及靶基因预测 | 第31-32页 |
2.4.2 家蚕感染BmCPV后血淋巴及中肠Novel-31*表达变化 | 第32页 |
2.4.3 家蚕感染BmCPV后血淋巴及中肠溶血素基因表达变化 | 第32-33页 |
2.5 本章讨论 | 第33-36页 |
第3章 Novel-31*对家蚕溶血素基因的表达调控 | 第36-48页 |
3.1 引言 | 第36页 |
3.2 实验材料与试剂 | 第36-38页 |
3.2.1 主要实验材料与试剂 | 第36页 |
3.2.2 主要实验仪器与设备 | 第36页 |
3.2.3 主要试剂的配置 | 第36-38页 |
3.3 实验方法 | 第38-44页 |
3.3.1 293T细胞培养 | 第38-39页 |
3.3.2 E.coli Top10感受态细胞制备 | 第39页 |
3.3.3 菌种保存(甘油菌) | 第39页 |
3.3.4 慢病毒表达载体构建 | 第39-42页 |
3.3.5 Novel-31*对靶基因作用验证 | 第42-43页 |
3.3.6 总RNA提取 | 第43-44页 |
3.3.7 反转录反应 | 第44页 |
3.3.8 实时荧光定量PCR检测溶血素基因及GST标签基因表达变化 | 第44页 |
3.4 结果与分析 | 第44-46页 |
3.4.1 载体p LNHX-UTR-GST及pLKO.3G-miR-N31*的构建与细胞转染效率 | 第44-45页 |
3.4.2 Novel-31*对靶基因表达的调控效果 | 第45-46页 |
3.5 本章讨论 | 第46-48页 |
第4章 Novel-31* mimics对家蚕溶血素基因的表达调控 | 第48-56页 |
4.1 引言 | 第48页 |
4.2 实验材料与试剂 | 第48-49页 |
4.2.1 主要实验材料与试剂 | 第48页 |
4.2.2 主要实验仪器与设备 | 第48页 |
4.2.3 主要试剂的配置 | 第48-49页 |
4.3 实验方法 | 第49-51页 |
4.3.1 家蚕BmN细胞培养 | 第49-50页 |
4.3.2 Novel-31* mimics转染Bm N细胞 | 第50页 |
4.3.3 Novel-31* mimics注射家蚕 | 第50页 |
4.3.4 组织收集 | 第50-51页 |
4.3.5 总RNA提取 | 第51页 |
4.3.6 反转录反应 | 第51页 |
4.3.7 实时荧光定量PCR检测溶血素基因表达变化 | 第51页 |
4.4 结果分析 | 第51-53页 |
4.4.1 Novel-31* mimics对家蚕Bm N细胞溶血素基因的调控效果 | 第51-52页 |
4.4.2 Novel-31* mimics对家蚕蚕血淋巴及中肠组织溶血素基因的调控效果 | 第52-53页 |
4.5 本章讨论 | 第53-56页 |
结论 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-65页 |
攻读硕士学位期间发表的学位论文 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |