| 中文摘要 | 第6-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 脂联素单抗的研制以及酶联免疫试剂盒建立 | 第16-37页 |
| 1.材料和方法 | 第16-20页 |
| 1.1 仪器 | 第16-17页 |
| 1.2 主要试剂和材料 | 第17-18页 |
| 1.3 常用的溶液和培养基配制 | 第18-20页 |
| 1.3.1 大肠杆菌培养基的配制 | 第18页 |
| 1.3.2 碱裂解法质粒抽提液 | 第18-19页 |
| 1.3.3 考马斯亮蓝染液 | 第19页 |
| 1.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳试剂 | 第19页 |
| 1.3.5 Western Blotting相关试剂 | 第19-20页 |
| 1.3.6 ELISA试剂 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-30页 |
| 2.1 基因克隆的构建 | 第20-23页 |
| 2.1.1 PCR扩增反应 | 第20-21页 |
| 2.1.2 小量质粒快速提取 | 第21页 |
| 2.1.3 酶切方法 | 第21页 |
| 2.1.4 胶回收试剂盒回收片段 | 第21-22页 |
| 2.1.5 连接反应 | 第22页 |
| 2.1.6 E.coli感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| 2.1.7 质粒DNA的转化 | 第23页 |
| 2.2 脂联素的蛋白表达以及纯化 | 第23-25页 |
| 2.2.1 重组蛋白的小量诱导表达 | 第23页 |
| 2.2.2 重组蛋白的大量诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.2.3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE) | 第24页 |
| 2.2.4 Ni-Sepharose亲和层析纯化 | 第24-25页 |
| 2.3 单抗的制备 | 第25-27页 |
| 2.3.1 小鼠的常规基础免疫 | 第25页 |
| 2.3.2 脾脏免疫 | 第25页 |
| 2.3.3 细胞融合 | 第25-26页 |
| 2.3.5 杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第26页 |
| 2.3.6 腹水诱导 | 第26页 |
| 2.3.7 细胞复苏 | 第26-27页 |
| 2.3.8 细胞换液 | 第27页 |
| 2.3.9 细胞传代 | 第27页 |
| 2.3.10 细胞冻存 | 第27页 |
| 2.4 单抗腹水的诱导纯化 | 第27-28页 |
| 2.4.1 单抗腹水的诱导及初纯 | 第27-28页 |
| 2.4.2 DE-52离子交换层析 | 第28页 |
| 2.5 研发ELISA试剂盒 | 第28-30页 |
| 2.5.1 间接ELISA法 | 第28页 |
| 2.5.2 HRP对单抗的NaIO4标记 | 第28-29页 |
| 2.5.3 单抗的亚型测定 | 第29页 |
| 2.5.4 单抗的SDS-PAGE鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5.5 脂联素双抗体夹心ELISA反应步骤 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-37页 |
| 3.1 脂联素重组抗原的表达 | 第30-31页 |
| 3.1.1 脂联素重组抗原的结构 | 第30-31页 |
| 3.1.2 重组抗原的制备及鉴定 | 第31页 |
| 3.2 单克隆抗体的研制 | 第31-33页 |
| 3.2.1 抗原免疫血清测定 | 第31-32页 |
| 3.2.2 单克隆抗体制备和基本性质鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 脂联素定量的ELISA试剂盒的构建 | 第33-34页 |
| 3.3.1 双抗体夹心法ELISA检测脂联素抗原以初筛高亲和力的配伍单抗 | 第33-34页 |
| 3.3.2 双抗体夹心法筛选高亲和力的配对的单克隆抗体 | 第34页 |
| 3.4 双抗体夹心法试剂盒性能验证 | 第34-37页 |
| 3.4.1 分析灵敏度 | 第34-35页 |
| 3.4.2 与同类产品的比较 | 第35页 |
| 3.4.3 精密度分析 | 第35-36页 |
| 3.4.4 生物参考区间 | 第36-37页 |
| 第二章 脂联素在急性心力衰竭中的诊断价值研究 | 第37-52页 |
| 1 材料和方法 | 第37-41页 |
| 1.1 研究对象 | 第37-39页 |
| 1.1.1 研究对象的一般资料 | 第37-38页 |
| 1.1.2 纳入标准 | 第38页 |
| 1.1.3 排除标准 | 第38-39页 |
| 1.2 检测方法 | 第39页 |
| 1.3 统计学方法 | 第39-40页 |
| 1.4 分组方法 | 第40-41页 |
| 2 结果 | 第41-52页 |
| 2.1 ADPN和NT-proBNP在急性心衰中的研究 | 第41-44页 |
| 2.1.1 急性心衰与对照组的基本资料 | 第41-42页 |
| 2.1.2 心衰组与对照组的血清ADPN、NT-proBNP比较 | 第42页 |
| 2.1.3 ADPN和NT-proBNP在NYHA分级血清中表达水平的比较 | 第42-43页 |
| 2.1.4 ADPN和NT-proBNP在不同病因学分组患者血清中表达水平的比较 | 第43-44页 |
| 2.2 ADPN和NT-proBNP与肾功能相关性的研究 | 第44-48页 |
| 2.2.1 ADPN和NT-proBNP与肾功能相关性分析 | 第44-46页 |
| 2.2.2 比较ADPN和NT-pro BNP在肾功能异常组和肾功能正常组血清中表达水平的差异 | 第46-48页 |
| 2.3 ADPN 和NT-pro BNP 的诊诊断效能分分析 | 第48-49页 |
| 2.3.1 ADPN和NT-proBNP以肾功能分组中的ROC分析 | 第48页 |
| 2.3.2 ADPN和NT-proBNP以肾功能和年龄二个因素进行分组分析 | 第48-49页 |
| 2.4 联合诊断 | 第49-52页 |
| 讨论 | 第52-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 文献综述 | 第63-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
