| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| 1.1 IL-22的发现和基因结构 | 第14页 |
| 1.2 IL-22受体和信号转导 | 第14-16页 |
| 1.2.1 IL-22膜受体 | 第14-15页 |
| 1.2.2 IL-22可溶性受体 | 第15页 |
| 1.2.3 IL-22信号转导 | 第15-16页 |
| 1.3 IL-22的组织分布及细胞来源 | 第16-17页 |
| 1.3.1 IL-22的组织分布 | 第16页 |
| 1.3.2 IL-22的细胞来源 | 第16-17页 |
| 1.4 IL-22生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.4.1 IL-22在自身免疫疾病中的作用 | 第18页 |
| 1.4.2 抗传染病中的作用 | 第18-19页 |
| 1.4.3 抗癌症中的作用 | 第19页 |
| 1.5 小结 | 第19-20页 |
| 第二章 猪IL-22的克隆表达与活性研究 | 第20-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 试验动物、细胞与毒株 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株、质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 猪PET-30a/IL-22重组质粒的构建 | 第21-26页 |
| 2.2.1.1 猪IL-22基因的克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.1.2 IL-22质粒转化 | 第23-26页 |
| 2.2.2 重组蛋白表达及纯化 | 第26-29页 |
| 2.2.2.1 重组蛋白诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 Western blot验证 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 蛋白表达条件优化 | 第28页 |
| 2.2.2.4 包涵体蛋白变性与复性 | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 重组蛋白纯化 | 第29页 |
| 2.2.3 重组蛋白活性测定 | 第29-32页 |
| 2.2.3.1 IPEC-J2细胞复苏 | 第29-30页 |
| 2.2.3.2 His-IL22细胞毒性试验 | 第30页 |
| 2.2.3.3 His/IL-22调控IPEC-J2中细胞因子的表达 | 第30-31页 |
| 2.2.3.4 His/IL-22对病毒感染IPEC-J2细胞的作用 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-39页 |
| 2.3.1 重组质粒PET-30a/IL-22的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 重组蛋白表达及纯化 | 第33-36页 |
| 2.3.2.1 His/IL-22表达与优化 | 第33-34页 |
| 2.3.2.2 His/IL-22 Western blot验证与纯化 | 第34-36页 |
| 2.3.3 His/IL-22活性测定 | 第36-39页 |
| 2.3.3.1 His/IL-22细胞毒性试验 | 第36页 |
| 2.3.3.2 His/IL-22对细胞因子的调控 | 第36-38页 |
| 2.3.3.3 His/IL-22对病毒复制的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 小结 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-44页 |
| 2.5.1 原核蛋白的表达与纯化 | 第40-41页 |
| 2.5.2 His/IL-22生物学活性 | 第41-44页 |
| 第三章 猪IL-22单克隆抗体的制备 | 第44-63页 |
| 3.1 试验材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 细胞、毒株、实验动物 | 第45页 |
| 3.1.2 载体、菌株 | 第45页 |
| 3.1.3 试验试剂及耗材 | 第45-46页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第46-47页 |
| 3.2 试验方法 | 第47-53页 |
| 3.2.1 抗原制备 | 第47页 |
| 3.2.1.1 GST/IL-22蛋白表达 | 第47页 |
| 3.2.1.2 GST/IL-22蛋白纯化 | 第47页 |
| 3.2.2 小鼠免疫及效价测定 | 第47-49页 |
| 3.2.2.1 小鼠免疫 | 第47-48页 |
| 3.2.2.2 小鼠血清抗体效价测定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 杂交瘤细胞株建立 | 第49-51页 |
| 3.2.3.1 SP2/0 细胞复苏和培养 | 第49页 |
| 3.2.3.2 饲养层细胞制备 | 第49页 |
| 3.2.3.3 SP2/0 细胞制备 | 第49-50页 |
| 3.2.3.4 脾细胞的制备 | 第50页 |
| 3.2.3.5 细胞融合 | 第50-51页 |
| 3.2.3.6 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第51页 |
| 3.2.3.7 杂交瘤细胞冻存和复苏 | 第51页 |
| 3.2.4 单克隆抗体制备 | 第51-53页 |
| 3.2.4.1 细胞培养上清制备 | 第51-52页 |
| 3.2.4.2 小鼠腹水制备 | 第52页 |
| 3.2.4.3 单克隆抗体亚类鉴定 | 第52页 |
| 3.2.4.4 腹水纯化 | 第52-53页 |
| 3.3 结果 | 第53-59页 |
| 3.3.1 抗原制备 | 第53-56页 |
| 3.3.1.1 pGEX-6P-1/IL-22重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.1.2 重组蛋白GST/IL-22表达 | 第54-55页 |
| 3.3.1.3 GST/IL-22 Western-blot验证及纯化 | 第55-56页 |
| 3.3.2 抗原包被浓度及血清稀释倍数优化 | 第56-57页 |
| 3.3.3 小鼠腹水制备 | 第57-59页 |
| 3.3.3.1 小鼠血清抗体效价测定 | 第57页 |
| 3.3.3.2 杂交瘤细胞株建立 | 第57-58页 |
| 3.3.3.3 抗体鉴定 | 第58-59页 |
| 3.4 小结 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-62页 |
| 3.5.1 抗原制备 | 第60页 |
| 3.5.2 小鼠免疫 | 第60-61页 |
| 3.5.3 联免疫吸附(ELISA)检测 | 第61页 |
| 3.5.4 抗体纯化 | 第61-62页 |
| 3.6 展望 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64页 |
| 创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
