| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 抗菌肽概述 | 第11-15页 |
| 1.1.1 抗菌肽plectasin及其改造肽NZ2114的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.2 抗菌肽piscidin及其改良肽pisL9K22WK的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 抗菌肽基因工程研究 | 第15-19页 |
| 1.2.1 抗菌肽在大肠杆菌中的表达 | 第15页 |
| 1.2.2 抗菌肽在昆虫杆状病毒的表达 | 第15-16页 |
| 1.2.3 抗菌肽在酿酒酵母中的表达 | 第16页 |
| 1.2.4 抗菌肽在莱茵衣藻叶绿体中的表达 | 第16-17页 |
| 1.2.5 抗菌肽在Pichiapink中的表达 | 第17-19页 |
| 1.3 毕赤酵母高效表达策略 | 第19-22页 |
| 1.3.1 毕赤酵母启动子概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 毕赤酵母分泌信号肽 | 第20-21页 |
| 1.3.3 温度 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的、意义及技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 抗菌肽在Pichiapink酵母中的表达 | 第23-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验仪器与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.3 培养基与常用溶液 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 FLD1序列的克隆 | 第26-30页 |
| 2.2.2 pisL9K22WK基因的克隆及连接启动子FLD1 | 第30-31页 |
| 2.2.3 NZ2114基因的优化、体外合成及连接启动子FLD1 | 第31-33页 |
| 2.2.4 表达载体的构建及转化Pichiapink | 第33-36页 |
| 2.2.5 重组酵母转化子的筛选及PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.6 重组酵母转化子的抑菌活性分析 | 第37-39页 |
| 2.2.7 酵母工程菌总蛋白Tris-Tricine SDS PAGE电泳 | 第39页 |
| 2.2.8 质谱鉴定目的片段 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 2.3.1 FLD1序列的克隆 | 第40-42页 |
| 2.3.2 pisL9K22WK基因的克隆及连接启动子FLD1 | 第42页 |
| 2.3.3 NZ2114基因的克隆及连接启动子FLD1 | 第42-43页 |
| 2.3.4 表达载体的构建及转化Pichiapink | 第43-45页 |
| 2.3.5 重组酵母转化子的筛选及PCR鉴定 | 第45-49页 |
| 2.3.6 重组酵母转化子的抑菌活性分析 | 第49-54页 |
| 2.3.7 酵母工程菌总蛋白Tris-Tricine SDS PAGE电泳 | 第54-55页 |
| 2.3.8 质谱鉴定目的片段 | 第55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 氯化胆碱诱导酵母工程菌的条件优化 | 第58-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第58页 |
| 3.1.1 实验仪器与试剂 | 第58页 |
| 3.1.2 菌株 | 第58页 |
| 3.1.3 培养基与常用溶液 | 第58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-60页 |
| 3.2.1 菌株的培养 | 第58页 |
| 3.2.2 氯化胆碱诱导酵母工程菌PH6的条件优化 | 第58-59页 |
| 3.2.3 氯化胆碱诱导酵母工程菌NZ6的条件优化 | 第59-60页 |
| 3.2.4 氯化胆碱和甲醇诱导酵母工程菌PH6表 达抗菌肽pisL9K22WK的比较 | 第60页 |
| 3.2.5 酵母工程菌PH6蛋白纯化条件优化 | 第60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-66页 |
| 3.3.1 氯化胆碱诱导酵母工程菌PH6的条件优化 | 第60-62页 |
| 3.3.2 氯化胆碱诱导酵母工程菌NZ6的条件优化 | 第62-64页 |
| 3.3.3 氯化胆碱和甲醇诱导酵母工程菌PH6表 达抗菌肽pisL9K22WK的比较 | 第64-65页 |
| 3.3.4 酵母工程菌PH6蛋白纯化条件优化 | 第65-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-69页 |
| 第四章 抗菌肽在莱茵衣藻叶绿体的表达 | 第69-84页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.1.1 菌种与质粒 | 第69页 |
| 4.1.2 培养基及相关试剂 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-75页 |
| 4.2.1 NZ2114基因的密码子优化及合成 | 第70页 |
| 4.2.2 抗菌肽NZ2114莱茵衣藻叶绿体表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 4.2.3 “基因枪法”转化莱茵衣藻 | 第71-73页 |
| 4.2.4 转基因衣藻的筛选 | 第73页 |
| 4.2.5 转基因衣藻基因组DNA的PCR检测 | 第73-74页 |
| 4.2.6 转基因衣藻的培养 | 第74页 |
| 4.2.7 转基因衣藻总蛋白的提取 | 第74-75页 |
| 4.2.8 转基因衣藻总蛋白的抑菌活性分析 | 第75页 |
| 4.2.9 转基因衣藻总蛋白Tris-Tricine SDS PAGE电泳分析 | 第75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-82页 |
| 4.3.1 NZ2114基因的密码子优化及合成 | 第75-77页 |
| 4.3.2 抗菌肽NZ2114莱茵衣藻叶绿体表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 4.3.3 转基因衣藻的筛选 | 第78-80页 |
| 4.3.4 转基因衣藻基因组DNA的PCR检测 | 第80页 |
| 4.3.5 转基因衣藻总蛋白的抑菌活性分析 | 第80-81页 |
| 4.3.6 转基因衣藻总蛋白的Tris-Tricine SDS PAGE电泳分析 | 第81-82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 结论及展望 | 第84-87页 |
| 5.1 主要结论 | 第84-85页 |
| 5.2 创新点 | 第85页 |
| 5.3 研究展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-92页 |
| 附录 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第94页 |
