| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 线虫的危害和防治方法 | 第12页 |
| 1.2 生防真菌淡紫拟青霉 | 第12-15页 |
| 1.2.1 对植物病原线虫的防治作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 对动物寄生虫的防治作用 | 第14页 |
| 1.2.3 对昆虫的防治作用 | 第14-15页 |
| 1.2.4 对植物病原菌的防治作用 | 第15页 |
| 1.2.5 淡紫拟青霉的其他作用 | 第15页 |
| 1.3 透明颤菌血红蛋白VHb | 第15-19页 |
| 1.3.1 透明颤菌血红蛋白的发现 | 第16-17页 |
| 1.3.2 透明颤菌血红蛋白的作用机制 | 第17-18页 |
| 1.3.3 透明颤菌血红蛋白的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 苏云金芽胞杆菌Cry5B蛋白 | 第19-20页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.5 引物 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-43页 |
| 2.2.1 淡紫拟青霉ACSS菌株对抗生素的敏感性分析 | 第25页 |
| 2.2.2 目的基因的人工设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 真菌筛选载体puPNT的构建 | 第26-30页 |
| 2.2.4 真菌表达载体puPNVT的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 真菌表达载体puPCTPNT的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.6 真菌表达载体转化根癌农杆菌 | 第33-34页 |
| 2.2.7 根癌农杆菌介导的淡紫拟青霉遗传转化体系的建立 | 第34页 |
| 2.2.8 淡紫拟青霉转化子的鉴定 | 第34-39页 |
| 2.2.9 淡紫拟青霉vgb转化子的遗传稳定性分析 | 第39页 |
| 2.2.10 淡紫拟青霉vgb转化子的小量摇瓶实验 | 第39页 |
| 2.2.11 淡紫拟青霉vgb转化子发酵液蛋白酶的活性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.12 淡紫拟青霉vgb转化子的发酵试验 | 第40-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-63页 |
| 3.1 淡紫拟青霉抗生素的敏感性分析 | 第43页 |
| 3.2 目的基因的人工设计和合成 | 第43-44页 |
| 3.2.1 vgb基因的人工设计 | 第43-44页 |
| 3.2.2 cry5B基因的人工设计 | 第44页 |
| 3.3 真菌筛选载体puPNT的构建 | 第44-45页 |
| 3.4 VHb表达载体puPNVT的构建 | 第45-46页 |
| 3.5 Cry5B表达载体puPCTPNT的构建 | 第46-47页 |
| 3.5.1 中间载体pcPCT的构建 | 第46页 |
| 3.5.2 载体puPCTPNT的构建 | 第46-47页 |
| 3.6 根癌农杆菌转化子的验证 | 第47-48页 |
| 3.7 淡紫拟青霉转化子在DNA水平上的验证 | 第48-51页 |
| 3.7.1 淡紫拟青霉转化子总DNA的抽提 | 第48页 |
| 3.7.2 淡紫拟青霉转化子中npt Ⅱ基因的PCR检测 | 第48-49页 |
| 3.7.3 淡紫拟青霉vgb转化子vgb基因的PCR检测 | 第49-50页 |
| 3.7.4 淡紫拟青霉cry5B转化子中cry5B基因的PCR检测 | 第50页 |
| 3.7.5 淡紫拟青霉转化子中npt Ⅱ基因的Southern blot分析 | 第50-51页 |
| 3.8 淡紫拟青霉vgb转化子在RNA水平上的验证 | 第51-52页 |
| 3.8.1 淡紫拟青霉总RNA的抽提 | 第51页 |
| 3.8.2 npt Ⅱ基因和vgb基因的RT-PCR | 第51-52页 |
| 3.9 淡紫拟青霉vgb转化子在蛋白质水平上的验证 | 第52-53页 |
| 3.10 淡紫拟青霉vgb转化子的遗传稳定性分析 | 第53页 |
| 3.11 淡紫拟青霉vgb转化子的小量摇瓶实验 | 第53-55页 |
| 3.11.1 淡紫拟青霉vgb转化子的溶氧初探 | 第53-54页 |
| 3.11.2 淡紫拟青霉vgb转化子溶氧量与菌丝球的数量关系 | 第54-55页 |
| 3.12 淡紫拟青霉vgb转化子发酵液蛋白酶的活性分析 | 第55-56页 |
| 3.13 淡紫拟青霉vgb转化子的15 L发酵试验 | 第56-63页 |
| 3.13.1 转化子和野生菌株在发酵过程中pH随时间的变化情况 | 第56-57页 |
| 3.13.2 转化子和野生菌株在发酵过程中氨态氮随时间的变化情况 | 第57-58页 |
| 3.13.3 转化子和野生菌株在发酵过程中还原糖随时间的变化情况 | 第58页 |
| 3.13.4 转化子和野生菌株在发酵过程中α-淀粉酶随时间的变化情况 | 第58-59页 |
| 3.13.5 转化子和野生菌株在发酵过程中发酵液总蛋白酶随时间的变化情况 | 第59-60页 |
| 3.13.6 转化子和野生菌株在发酵过程中发酵液几丁质酶随时间的变化情况 | 第60-61页 |
| 3.13.7 转化子和野生菌株发酵终止后的生物量情况 | 第61页 |
| 3.13.8 转化子和野生菌株在发酵过程中产孢率的比较情况 | 第61-63页 |
| 4 总结与讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
