DNA甲基化与可变剪接影响荷斯坦公牛睾丸FBXW11基因表达和精子活力
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 影响精液品质的主要因素 | 第10-12页 |
| 1.1.1 环境因素对精液品质主要指标的影响 | 第10-11页 |
| 1.1.2 营养物质对精液品质的影响 | 第11-12页 |
| 1.2 精液品质的评定 | 第12-13页 |
| 1.3 基于分子水平选育优质种公牛的研究方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 常规育种 | 第13页 |
| 1.3.2 分子育种 | 第13页 |
| 1.3.3 分子育种研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 精子发生 | 第14-15页 |
| 1.5 泛素蛋白酶体系统 | 第15-16页 |
| 1.5.1 泛素蛋白酶体系统的调节过程 | 第15-16页 |
| 1.6 FBXW11基因简介 | 第16-17页 |
| 1.7 可变剪接 | 第17-18页 |
| 1.8 甲基化 | 第18-20页 |
| 1.8.1 DNA甲基化与选择性剪接 | 第18-19页 |
| 1.8.2 FBXW11基因的研究进展和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 候选基因的筛选与表达验证 | 第20-37页 |
| 2.1 试验材料的制备 | 第20-22页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 Trizol法总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.1.3 样品总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.1.4 cDNA合成 | 第21-22页 |
| 2.2 候选基因的筛选 | 第22-23页 |
| 2.3 蛋白表达验证 | 第23-25页 |
| 2.3.1 HE染色切片检测 | 第23页 |
| 2.3.2 抗体的选择与分析 | 第23页 |
| 2.3.3 免疫组化 | 第23-24页 |
| 2.3.4 免疫蛋白印迹 | 第24-25页 |
| 2.4 mRNA表达验证 | 第25-27页 |
| 2.4.1 FBXW11在睾丸中的表达 | 第25-26页 |
| 2.4.2 FBXW11剪接体的鉴定 | 第26页 |
| 2.4.3 连接与转化 | 第26-27页 |
| 2.4.4 测序鉴定 | 第27页 |
| 2.4.5 半定量分析 | 第27页 |
| 2.4.6 相对定量分析 | 第27页 |
| 2.4.7 分析剪接体表达比例差异 | 第27页 |
| 2.5 结果与分析 | 第27-34页 |
| 2.5.1 HE染色检测样品 | 第27-28页 |
| 2.5.2 抗体的选择与分析 | 第28-29页 |
| 2.5.3 FBXW11蛋白表达定位 | 第29-30页 |
| 2.5.4 FBXW11蛋白表达分析 | 第30-31页 |
| 2.5.5 FBXW11在睾丸样品中的表达鉴定 | 第31页 |
| 2.5.6 FBXW11剪接体的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.5.7 半定量分析 | 第32-33页 |
| 2.5.8 相对定量分析 | 第33-34页 |
| 2.5.9 相对定量分析 | 第34页 |
| 2.6 讨论 | 第34-36页 |
| 2.7 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 FBXW11剪接体表达影响精液品质的机理 | 第37-41页 |
| 3.1 试验方法 | 第37页 |
| 3.1.1 氨基酸序列分析 | 第37页 |
| 3.1.2 预测信号肽的存在及位置 | 第37页 |
| 3.1.3 二级结构预测 | 第37页 |
| 3.2 试验结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.2.1 N末端分析 | 第37-38页 |
| 3.2.2 信号肽预测分析 | 第38页 |
| 3.2.3 信号肽预测分析 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 FBXW11可变剪接产生的原因 | 第41-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 4.2.1 单核苷酸多态性 | 第41页 |
| 4.2.2 DNA甲基化 | 第41页 |
| 4.2.3 确定核心启动子区域 | 第41页 |
| 4.2.4 双酶切体系 | 第41-43页 |
| 4.2.5 双荧光素酶报告 | 第43-45页 |
| 4.2.6 甲基化分析 | 第45-47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-51页 |
| 4.3.1 单核苷酸多态性 | 第47页 |
| 4.3.2 DNA甲基化 | 第47-48页 |
| 4.3.3 单核苷酸多态性 | 第48页 |
| 4.3.4 核心启动子的确定 | 第48-49页 |
| 4.3.5 甲基化分析 | 第49-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51页 |
| 4.5 小结 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第54页 |
| 下一步计划 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第62-63页 |
| 引物列表 | 第63-65页 |
| 附录1 所用主要仪器设备 | 第65-68页 |
| 附录2 所用试剂 | 第68-71页 |
