| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| 1.1 肠球菌属的生物特性 | 第11页 |
| 1.2 肠球菌的分型 | 第11页 |
| 1.3 肠球菌的致病性研究 | 第11-12页 |
| 1.4 肠球菌的毒力基因 | 第12-13页 |
| 1.4.1 细胞溶解素(cyl) | 第12页 |
| 1.4.2 表面蛋白(Esp) | 第12页 |
| 1.4.3 聚类物质(AS) | 第12-13页 |
| 1.4.4 蛋白明胶酶E(GelE) | 第13页 |
| 1.4.5 胶原蛋白粘附素(Ace) | 第13页 |
| 1.4.6 心内膜炎基因抗原(EfaA) | 第13页 |
| 1.5 肠球菌的耐药性 | 第13-14页 |
| 1.6 肠球菌对万古霉素耐药性研究 | 第14页 |
| 1.7 肠球菌耐药性与毒力基因的相关性研究 | 第14-16页 |
| 2 肠球菌的分离、鉴定与同源性分析 | 第16-24页 |
| 2.1 材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 病料的来源 | 第16页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第16页 |
| 2.1.3 生物学试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.4 试验动物 | 第17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 试验方法设计方案 | 第17页 |
| 2.2.2 菌株的培养与纯化 | 第17页 |
| 2.2.3 分离菌株的鉴定 | 第17-20页 |
| 2.2.4 临床分离菌株对小白鼠的致病性试验 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-23页 |
| 2.3.1 菌株菌落特征及革兰氏染色结果 | 第20页 |
| 2.3.2 生化试验结果 | 第20-21页 |
| 2.3.3 16s-rRNA PCR试验测序鉴定结果 | 第21-23页 |
| 2.3.4 动物试验结果 | 第23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-24页 |
| 3 羊源肠球菌属与屎肠球菌双重PCR方法的建立 | 第24-31页 |
| 3.1 材料 | 第24页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第24页 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 | 第24页 |
| 3.2 方法 | 第24-26页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第24页 |
| 3.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 3.2.3 双重PCR扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.4 双重PCR特异性试验 | 第25页 |
| 3.2.5 双重PCR的敏感性试验 | 第25页 |
| 3.2.6 双重PCR方法的验证 | 第25-26页 |
| 3.3 结果与分析 | 第26-29页 |
| 3.3.1 单对引物特异性验证及双重PCR反应结果 | 第26页 |
| 3.3.2 双重PCR特异性试验结果 | 第26-27页 |
| 3.3.3 双重PCR反应敏感性试验结果 | 第27-28页 |
| 3.3.4 模拟感染样品的特异性试验结果 | 第28-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-31页 |
| 4 临床分离菌株耐药性及耐药基因的检测 | 第31-37页 |
| 4.1 材料 | 第31-32页 |
| 4.1.1 试验菌株 | 第31页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 4.1.3 试验所用药物 | 第31-32页 |
| 4.2 方法 | 第32-34页 |
| 4.2.1 试验所用药物的配制方法 | 第32-33页 |
| 4.2.2 细菌培养 | 第33页 |
| 4.2.3 细菌的耐药性检测方法 | 第33页 |
| 4.2.4 细菌总DNA的组提取 | 第33-34页 |
| 4.2.5 耐药基因检测 | 第34页 |
| 4.3 结果及分析 | 第34-36页 |
| 4.3.1 细菌耐药性检测结果 | 第34页 |
| 4.3.2 耐药基因试验结果 | 第34-36页 |
| 4.4 讨论 | 第36-37页 |
| 5 羊源屎肠球菌毒力基因的检测及心内膜炎基因EFAA基因原核表达 | 第37-51页 |
| 5.1 材料 | 第37页 |
| 5.1.1 试验所用表达载体 | 第37页 |
| 5.1.2 试验所用试剂 | 第37页 |
| 5.2 方法 | 第37-43页 |
| 5.2.1 主要溶液的配置方法 | 第38页 |
| 5.2.2 提取临床分离菌株的总DNA | 第38页 |
| 5.2.3 临床分离菌株毒力基因的检测 | 第38-39页 |
| 5.2.4 EfaA毒力基因的纯化 | 第39页 |
| 5.2.5 EfaA毒力基因克隆与检测 | 第39-40页 |
| 5.2.6 EfaA毒力基因克隆质粒提取 | 第40页 |
| 5.2.7 空质粒的制备 | 第40页 |
| 5.2.8 PCR方法鉴定提取质粒的正确表达方向 | 第40页 |
| 5.2.9 EfaA毒力基因表达的检测双酶切试验 | 第40-41页 |
| 5.2.10 IPTG诱导试验 | 第41-42页 |
| 5.2.11 Western blot检测 | 第42-43页 |
| 5.2.12 抗体反应和显色反应 | 第43页 |
| 5.3 试验结果 | 第43-49页 |
| 5.3.1 羊源屎肠球菌毒力基因的检测结果 | 第43页 |
| 5.3.2 胶原蛋白黏附素(Ace)毒力基因检测结果 | 第43页 |
| 5.3.3 细胞溶解素(cyl)检测结果 | 第43-44页 |
| 5.3.4 蛋白明胶酶E(GelE)检测结果 | 第44页 |
| 5.3.5 心内膜炎抗原基因(EfaA)检测结果 | 第44-45页 |
| 5.3.6 聚集物质基因(AS)检测结果 | 第45-46页 |
| 5.3.7 表面蛋白基因(Esp)检测结果 | 第46页 |
| 5.3.8 ATCC 51299毒力基因检测结果 | 第46-47页 |
| 5.3.9 EfaA测序结果 | 第47页 |
| 5.3.10 双酶切试验结果 | 第47-48页 |
| 5.3.11 IPTG诱导试验结果 | 第48页 |
| 5.3.12 Western Blot检测结果 | 第48-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-51页 |
| 6 全文结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
