| 主要缩略词表 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 前言 | 第17-22页 |
| 第一章 埃博拉病毒包膜糖蛋白特异抗体的筛选 | 第22-42页 |
| 1. 材料和方法 | 第22-33页 |
| 1.1 假病毒评价疫苗免疫受试者血清的中和活性 | 第23页 |
| 1.2 Ficoll-Hypaque法分离外周血单个核细胞 | 第23-24页 |
| 1.3 流式细胞术分选单个抗体分泌细胞 | 第24-25页 |
| 1.4 单细胞PCR扩增抗体可变区基因 | 第25-28页 |
| 1.5 线性表达框构建抗体全长基因 | 第28-32页 |
| 1.6 ELISA快速筛选糖蛋白特异抗体 | 第32-33页 |
| 2. 结果 | 第33-40页 |
| 2.1 EBOV假病毒评价受试者血清的中和活性 | 第33-34页 |
| 2.2 流式细胞术分选抗体分泌细胞 | 第34-36页 |
| 2.3 单细胞PCR获取抗体可变区基因 | 第36-37页 |
| 2.4 构建抗体重链和轻链全长基因 | 第37-38页 |
| 2.5 筛选具有GP结合活性的单克隆抗体 | 第38-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-42页 |
| 第二章 抗原的制备和单克隆抗体结合特性的分析 | 第42-67页 |
| 1. 材料和方法 | 第43-50页 |
| 1.1 单克隆抗体的制备 | 第43-45页 |
| 1.1.1 抗体的序列同源性分析 | 第43页 |
| 1.1.2 抗体表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| 1.1.3 Expi293系统表达单克隆抗体 | 第44页 |
| 1.1.4 Protein A亲和纯化单克隆抗体 | 第44-45页 |
| 1.2 GPdmucin的表达与纯化 | 第45-49页 |
| 1.2.1 GPdmucin在原核系统中的表达 | 第46-47页 |
| 1.2.2 GPdmucin在昆虫系统中的表达 | 第47-48页 |
| 1.2.3 GPdmucin在哺乳动物系统中的表达 | 第48-49页 |
| 1.3 截短型GP——sGP、GPecto及GP1的表达纯化 | 第49-50页 |
| 1.4 单克隆抗体特性分析 | 第50页 |
| 1.4.1 单克隆抗体的特异性分析 | 第50页 |
| 1.4.2 单克隆抗体的结合区域分析 | 第50页 |
| 2. 结果 | 第50-65页 |
| 2.1 单克隆抗体的制备 | 第50-55页 |
| 2.1.1 单抗基因序列同源性分析 | 第50-51页 |
| 2.1.2 抗体表达质粒的构建 | 第51-53页 |
| 2.1.3 单抗的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 2.2 GP及其截短型的表达与纯化 | 第55-61页 |
| 2.2.1 GPdmucin在原核系统中的表达、复性和鉴定 | 第55-56页 |
| 2.2.2 GPdmucin在昆虫系统中的表达和鉴定 | 第56-58页 |
| 2.2.3 GPdmucin在哺乳动物细胞中的表达、纯化及活性鉴定 | 第58-61页 |
| 2.2.4 三种不同系统表达GPdmucin的结果比较 | 第61页 |
| 2.3 截短型GP——sGP、GPecto及GP1的表达与纯化 | 第61-63页 |
| 2.4 单克隆抗体的特性分析 | 第63-65页 |
| 2.4.1 纯化单抗的结合特异性分析 | 第63-64页 |
| 2.4.2 截短型GP分析特异性单抗的结合区域 | 第64-65页 |
| 3. 讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 单抗体外和体内中和活性的评价 | 第67-79页 |
| 1. 材料和方法 | 第68-71页 |
| 1.1 体外评价结合单抗的中和活性 | 第68页 |
| 1.2 小鼠模型中评价中和单抗的保护活性 | 第68-69页 |
| 1.3 丝状病毒GP分析 1B3的交叉保护活性 | 第69-71页 |
| 1.3.1 丝状病毒GP分析 1B3的交叉结合活性 | 第69-70页 |
| 1.3.2 体外评价 1B3的交叉中和活性 | 第70-71页 |
| 2. 结果 | 第71-77页 |
| 2.1 单抗的体外中和活性 | 第71-73页 |
| 2.2 小鼠模型中 1B3单抗的保护活性 | 第73-74页 |
| 2.3 1B3单抗对丝状病毒的交叉中和活性的评价 | 第74-77页 |
| 2.3.1 1B3单抗与丝状病毒GP的交叉结合活性 | 第74-76页 |
| 2.3.2 1B3单抗的交叉中和活性的研究 | 第76-77页 |
| 3. 讨论 | 第77-79页 |
| 第四章 1B3单抗结合表位与中和机制的研究 | 第79-102页 |
| 1. 材料和方法 | 第80-88页 |
| 1.1 Discovery Studio软件预测分析 1B3的结合表位 | 第80-83页 |
| 1.1.1 计算机软件预测结合模式 | 第80页 |
| 1.1.2 表面展示分析验证GP关键氨基酸 | 第80-83页 |
| 1.2 竞争结合实验分析结合表位 | 第83-85页 |
| 1.3 体外研究抗体对GP与其受体结合的抑制活性 | 第85-87页 |
| 1.3.1 GP受体NPC1 Domain C的制备 | 第85-86页 |
| 1.3.2 GP在细胞内被酶切的终产物（GPcl）的制备 | 第86-87页 |
| 1.3.3 体外GPcl与NPC1 Domain C结合阻断实验 | 第87页 |
| 1.4 体外分析抗体能否阻断蛋白酶对GP的水解 | 第87-88页 |
| 1.4.1 高效液相分析单抗饱和结合GPdmucin | 第87页 |
| 1.4.2 Western印迹检测单抗是否阻断GPdmucin被酶切 | 第87-88页 |
| 2. 结果 | 第88-99页 |
| 2.1 Discovery Studio预测结果与验证 | 第88-93页 |
| 2.1.1 Discovery Studio预测GP与 1B3结合模式 | 第88-90页 |
| 2.1.2 Western印迹和流式分析GP突变株与 1B3结合活性的变化 | 第90-92页 |
| 2.1.3 受体结合区非保守氨基酸突变分析 | 第92-93页 |
| 2.2 竞争结合实验分析抗体结合表位 | 第93-95页 |
| 2.3 体外研究 1B3对GPcl与NPC1-C结合抑制作用 | 第95-98页 |
| 2.3.1 NPC1 Domain C和GPcl的制备 | 第95-97页 |
| 2.3.2 1B3对GPcl与NPC1-C结合抑制实验 | 第97-98页 |
| 2.4 体外研究 1B3对thermolysin酶切的阻断作用 | 第98-99页 |
| 3. 讨论 | 第99-102页 |
| 结论 | 第102页 |
| 展望 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-107页 |
| 附录1 抗体和GP序列 | 第107-110页 |
| 附录2 主要溶液配制 | 第110-113页 |
| 个人简历 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
