| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 一、氧化应激与神经损伤的关系 | 第15页 |
| 二、Keap1-Nrf2信号通路调控氧化应激 | 第15-17页 |
| 三、Nrf2信号通路激动剂的研究进展 | 第17-18页 |
| 四、Britanin通过靶向Keap1蛋白发挥神经保护作用 | 第18-20页 |
| 第一章 Britanin的体外神经保护作用研究 | 第20-39页 |
| 一、引言 | 第20页 |
| 二、实验材料 | 第20-22页 |
| （一）实验细胞株 | 第20页 |
| （二）实验试剂 | 第20-21页 |
| （三）实验仪器 | 第21-22页 |
| 三、实验设计与方法 | 第22-29页 |
| （一）PC12细胞培养 | 第22页 |
| （二）Britanin作用于PC12细胞的适宜浓度范围 | 第22页 |
| （三）谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型构建 | 第22-23页 |
| （四）Britanin对PC12细胞损伤的保护作用 | 第23-24页 |
| （五）SD大鼠原代皮层神经元的分离培养方法 | 第24-26页 |
| （六）Britanin作用于原代皮层神经元的适宜浓度范围 | 第26页 |
| （七）OGD-R诱导原代皮层神经元损伤模型构建 | 第26页 |
| （八）Britanin对原代皮层神经元损伤的保护作用 | 第26-29页 |
| 四、实验结果 | 第29-38页 |
| （一）Britanin对PC12细胞的适宜浓度范围 | 第29-30页 |
| （二）Britanin保护PC12细胞抵抗谷氨酸诱导损伤 | 第30-33页 |
| （三）Britanin对原代皮层神经元的适宜浓度范围 | 第33页 |
| （四）Britanin保护原代神经元抵抗OGD-R模型损伤 | 第33-38页 |
| 五、小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第二章 Britanin通过激活Nrf2通路发挥神经保护作用 | 第39-58页 |
| 一、引言 | 第39页 |
| 二、实验材料 | 第39-41页 |
| （一）实验细胞株 | 第39-40页 |
| （二）实验试剂 | 第40-41页 |
| （三）实验仪器 | 第41页 |
| 三、实验设计与方法 | 第41-51页 |
| （一）DPPH活性检测实验 | 第41-42页 |
| （二）ARE报告基因实验 | 第42-43页 |
| （三）Nrf2基因干扰实验 | 第43-46页 |
| （四）实时荧光定量PCR实验 | 第46-49页 |
| （五）蛋白免疫印迹实验 | 第49-51页 |
| 四、实验结果 | 第51-57页 |
| （一）DPPH活性检测实验 | 第51页 |
| （二）ARE报告基因实验 | 第51-52页 |
| （三）Nrf2基因干扰实验 | 第52-53页 |
| （四）实时荧光定量PCR实验 | 第53-54页 |
| （五）蛋白质免疫印迹实验 | 第54-57页 |
| 五、小结与讨论 | 第57-58页 |
| 第三章 Britanin靶向Keap1蛋白激活Nrf2通路 | 第58-82页 |
| 一、引言 | 第58-59页 |
| 二、实验材料 | 第59-61页 |
| （一）细胞、菌株及质粒 | 第59页 |
| （二）实验试剂 | 第59-60页 |
| （三）实验仪器 | 第60-61页 |
| 三、实验设计与方法 | 第61-68页 |
| （一）DiscoveRx’s KINOMEscan激酶筛选实验 | 第61页 |
| （二）Britanin的生物素化探针合成及活性评价 | 第61-62页 |
| （三）Keap1蛋白及其BTB结构域的表达和纯化 | 第62-63页 |
| （四）应用Britanin探针Pull-down靶标蛋白Keap1 | 第63-64页 |
| （五）LC-MS-MS实验确证共价结合位点 | 第64-65页 |
| （六）Keap1蛋白半胱氨酸定点突变实验 | 第65-66页 |
| （七）Britanin与Keap1蛋白BTB结构域共结晶 | 第66-67页 |
| （八）Britanin对Nrf2泛素化修饰的调控作用及机制 | 第67-68页 |
| 四、实验结果 | 第68-81页 |
| （一）DiscoveRx’s KINOMEscan激酶筛选实验 | 第68-70页 |
| （二）Britanin的生物素化探针的合成及活性评价 | 第70-71页 |
| （三）Keap1蛋白及其BTB结构域的表达和纯化 | 第71页 |
| （四）应用Britanin探针Pull-down靶标蛋白Keap1 | 第71-73页 |
| （五）LC-MS-MS实验确证共价结合位点 | 第73-75页 |
| （六）Keap1蛋白序列中半胱氨酸定点突变 | 第75页 |
| （七）Britanin与Keap1蛋白BTB结构域的共结晶 | 第75-78页 |
| （八）Britanin对Nrf2泛素化修饰的调控作用及机制 | 第78-81页 |
| 五、小结与讨论 | 第81-82页 |
| 第四章 Britanin防治大鼠脑缺血再灌注损伤研究 | 第82-96页 |
| 一、引言 | 第82页 |
| 二、实验材料 | 第82-84页 |
| （一）实验动物 | 第82页 |
| （二）实验用具及耗材 | 第82-83页 |
| （三）药品与试剂 | 第83页 |
| （四）实验仪器 | 第83-84页 |
| 三、实验设计与方法 | 第84-89页 |
| （一）SD大鼠MCAO模型的构建 | 第84-85页 |
| （二）实验动物分组及给药方法 | 第85页 |
| （三）神经行为学评分 | 第85-86页 |
| （四）脑组织TTC染色 | 第86页 |
| （五）Britanin对大鼠脑组织Nrf2通路的调控作用 | 第86-88页 |
| （六）Britanin单剂量给药的治疗时间窗研究 | 第88-89页 |
| 四、实验结果 | 第89-95页 |
| （一）梗死体积及神经功能评分 | 第89-91页 |
| （二）Britanin对大鼠脑组织Nrf2通路的调控作用 | 第91-92页 |
| （三）Britanin单剂量灌胃处理的防治时间窗 | 第92-95页 |
| 五、小结与讨论 | 第95-96页 |
| 第五章 全文总结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 附录 | 第106-111页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
