| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 黑色素瘤 | 第15-16页 |
| 1.2 MSCs | 第16-24页 |
| 1.2.1 MSCs概述 | 第16页 |
| 1.2.2 MSCs对肿瘤细胞的直接抑制作用机制 | 第16-20页 |
| 1.2.2.1 MSCs通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制肿瘤细胞增殖 | 第16-18页 |
| 1.2.2.2 MSCs通过下调Akt信号通路抑制肿瘤细胞增殖 | 第18页 |
| 1.2.2.3 MSCs通过分泌微泡抑制肿瘤细胞增殖 | 第18-19页 |
| 1.2.2.4 MSCs抑制肿瘤细胞增殖的其他途径 | 第19-20页 |
| 1.2.3 MSCs抑制肿瘤细胞增殖的间接机制 | 第20-23页 |
| 1.2.3.1 MSCs向肿瘤归巢的机制 | 第20-21页 |
| 1.2.3.2 MSCs免疫抑制的机制 | 第21-22页 |
| 1.2.3.3 MSCs间接抑制肿瘤细胞增殖的机制 | 第22-23页 |
| 1.2.4 MSCs是否抑制肿瘤细胞增殖的争议 | 第23-24页 |
| 1.3 NF-κB信号通路,IL-1与IL-1Ra | 第24-25页 |
| 1.4 总结 | 第25-27页 |
| 2 实验材料 | 第27-35页 |
| 2.1 细胞株及细胞培养所用培养基 | 第27页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第27页 |
| 2.1.2 细胞培养所用培养基 | 第27页 |
| 2.2 主要试剂和试剂盒 | 第27-29页 |
| 2.3 质粒和菌株 | 第29页 |
| 2.4 实验动物 | 第29页 |
| 2.5 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.6 实验耗材 | 第30-31页 |
| 2.7 主要溶液的配制 | 第31-35页 |
| 2.7.1 核酸电泳缓冲液的配制 | 第31页 |
| 2.7.2 蛋白质电泳和Western Blot所用试剂的配制 | 第31-32页 |
| 2.7.3 细胞实验主要溶液配制 | 第32-34页 |
| 2.7.4 其他实验溶液配制 | 第34-35页 |
| 3 实验方法 | 第35-56页 |
| 3.1 MSCs、HEK-293细胞和A375细胞的培养 | 第35-37页 |
| 3.1.1 MSCs的复苏 | 第35页 |
| 3.1.2 MSCs的传代 | 第35页 |
| 3.1.3 MSCs的冻存 | 第35-36页 |
| 3.1.4 A375细胞和HEK-293细胞的复苏 | 第36页 |
| 3.1.5 A375细胞和HEK-293细胞的传代 | 第36页 |
| 3.1.6 A375细胞和HEK-293细胞的冻存 | 第36-37页 |
| 3.2 MSCs对A375细胞增殖能力的影响 | 第37-41页 |
| 3.2.1 MSCs与A375细胞共培养对A375的抑制效应分析 | 第37-38页 |
| 3.2.2 MSCs CM对A375细胞的抑制效应分析 | 第38-39页 |
| 3.2.3 MSCs CM对A375细胞周期的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.4 MSCs CM对NF-κB信号通路的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 沉默IL-1Ra表达的多克隆细胞MSCs-S和过表达IL-1Ra的多克隆细胞MSCs-O的获得 | 第41-49页 |
| 3.3.1 IL-1Ra和GAPDH的引物设计 | 第41-42页 |
| 3.3.2 总RNA的提取和反转录 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组载体pcDNA3.1-EGFP-IL-1Ra和pGPH1-IL-1Ra的构建 | 第43-46页 |
| 3.3.4 MSCs-S和MSCs-O的获得 | 第46-47页 |
| 3.3.5 IL-1Ra在MSCs、MSCs-O和MSCs-S中的表达水平的检测 | 第47-49页 |
| 3.4 MSCs-S CM和MSCs-O CM对A375细胞增殖能力的影响 | 第49-52页 |
| 3.4.1 MSCs-S CM对A375细胞增殖的抑制效应分析 | 第49-50页 |
| 3.4.2 MSCs-S CM对A375细胞周期的影响 | 第50页 |
| 3.4.3 MSCs-O CM对A375细胞的抑制效应分析 | 第50-51页 |
| 3.4.4 MSCs-O CM对A375细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析及对NF-κB信号通路的影响 | 第52-54页 |
| 3.5.1 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析 | 第52页 |
| 3.5.2 MSCs-S和MSCs-O CM对NF-κB信号通路的影响 | 第52-54页 |
| 3.6 裸鼠异位瘤实验 | 第54-56页 |
| 3.6.1 A375细胞裸鼠异位瘤模型的建立 | 第54-55页 |
| 3.6.2 肿瘤的组织学检测 | 第55-56页 |
| 4 结果 | 第56-76页 |
| 4.1 MSCs对A375细胞增殖的抑制作用 | 第56-62页 |
| 4.1.1 MSCs与A375细胞共培养对A375细胞的抑制效应分析 | 第56-58页 |
| 4.1.2 MSCs CM对A375细胞的抑制效应分析 | 第58-60页 |
| 4.1.3 MSCs CM对A375细胞周期的影响 | 第60页 |
| 4.1.4 MSCs CM对NF-κB信号通路的影响 | 第60-62页 |
| 4.2 MSCs对A375细胞增殖的抑制作用的机制 | 第62-72页 |
| 4.2.1 MSCs中IL-1Ra表达水平的调节 | 第62-64页 |
| 4.2.2 降低IL-1Ra表达水平减弱了MSCs对A375细胞增殖的抑制作用 | 第64-66页 |
| 4.2.3 提高IL-1Ra表达水平增强了MSCs对A375细胞增殖的抑制作用 | 第66-68页 |
| 4.2.4 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞周期的影响 | 第68-71页 |
| 4.2.5 MSCs-S和MSCs-O CM对A375细胞抑制效应的分析及对NF-κB信号通路的影响 | 第71-72页 |
| 4.3 IL-1Ra表达水平对A375细胞体内增殖的影响 | 第72-76页 |
| 5 讨论 | 第76-80页 |
| 6 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 附录A 英文缩略词表 | 第88-91页 |
| 作者简历 | 第91-93页 |
| 学位论文数据集 | 第93页 |
