| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| M1GS 核酶技术 | 第9-10页 |
| 丙型肝炎病毒简介 | 第10-12页 |
| 1 材料与仪器 | 第12-16页 |
| ·实验材料 | 第12-15页 |
| ·主要实验仪器 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-34页 |
| ·HCV 核心基因质粒载体的鉴定 | 第16-19页 |
| ·HCV 核心基因原核表达载体的鉴定 | 第16-17页 |
| ·HCV 核心基因真核表达载体的鉴定 | 第17-19页 |
| ·HCV 核心基因 mRNA 的体外转录及鉴定 | 第19-22页 |
| ·HCV 核心基因的原核表达载体的线性化及5′平滑 | 第19页 |
| ·HCV 核心基因RNA 的体外转录 | 第19-20页 |
| ·HCV 核心基因m RNA 的鉴定 | 第20-22页 |
| ·M1GS 核酶的克隆与鉴定 | 第22-27页 |
| ·验证 M1RNA 重组质粒 pFL117 | 第22页 |
| ·搜寻GS 互补靶位点 | 第22-23页 |
| ·设计M1GS 上下游引物 | 第23-24页 |
| ·M1GS 核酶DNA 模板的制备 | 第24页 |
| ·M1GS 核酶的原核表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·M1GS 核酶体外转录及鉴定 | 第26页 |
| ·M1GS 核酶的真核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·胞外切割反应 | 第27-29页 |
| ·建立胞外切割反应体系 | 第27-29页 |
| ·影响M1GS 核酶体外切割活性的因素 | 第29页 |
| ·底物高级结构对M1GS 核酶体外切割效率的影响 | 第29页 |
| ·不同核酶/底物比例下M1GS 体外切割现象的变化 | 第29页 |
| ·胞内切割反应 | 第29-34页 |
| ·细胞培养及转染 | 第29-31页 |
| ·HCV 核心基因m RNA 的RT-PCR 半定量 | 第31-32页 |
| ·HCV 核心蛋白的Western Blot | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-45页 |
| ·HCV 核心基因质粒载体的鉴定结果 | 第34-36页 |
| ·HCV 核心基因原核表达载体的鉴定 | 第34-36页 |
| ·HCV 核心基因真核表达载体的鉴定 | 第36页 |
| ·M1GS 核酶的构建与克隆 | 第36-38页 |
| ·M1GS 核酶原核表达载体的鉴定 | 第36-38页 |
| ·HCV核心基因mRNA及M1GS核酶RNA的鉴定 | 第38-39页 |
| ·M1GS 真核表达载体的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·胞外切割实验 | 第40-42页 |
| ·影响人工核酶 M1GS 体外切割效果的因素 | 第42-43页 |
| ·底物RNA 高级结构的影响 | 第42页 |
| ·底物与核酶的反应比例对M1GS 体外切割活性的影响 | 第42-43页 |
| ·胞内切割实验 | 第43-45页 |
| ·HCV核心基因mRNA的半定量RT-PCR | 第43-45页 |
| ·HCV核心蛋白的Western Blot | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| ·靶位的确定 | 第45-46页 |
| ·GS 的设计 | 第46页 |
| ·桥序列的设计 | 第46-47页 |
| ·关于底物片段的处理 | 第47-48页 |
| ·底物与核酶的比例 | 第48页 |
| ·靶RNA 的半定量RT-PCR | 第48页 |
| 5 小结及展望 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| ·展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 附录一：质粒载体图谱 | 第53-55页 |
| 附录二：测序图 | 第55-59页 |
| 附录三：Genbank 公布 M1RNA 基因全序列 | 第59-60页 |
| 附录四：在读硕士期间发表科研论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
