| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 小菜蛾的危害与防治概况 | 第9页 |
| 1.2 昆虫种群遗传调控 | 第9-10页 |
| 1.3 间隙连接 | 第10-15页 |
| 1.3.1 Innexin蛋白类型以及在不同昆虫中的分布 | 第10-11页 |
| 1.3.2 间隙连接的交流机制 | 第11-12页 |
| 1.3.3 Innexin蛋白的分子结构 | 第12-14页 |
| 1.3.4 Innexin蛋白的功能 | 第14-15页 |
| 1.3.5 zpg蛋白 | 第15页 |
| 1.4 基因表达及功能研究方法 | 第15-16页 |
| 1.4.1 荧光实时定量PCR | 第15-16页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9系统 | 第16页 |
| 1.4.3 RNAi技术 | 第16页 |
| 1.5 研究意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 虫源及饲养 | 第17页 |
| 2.2 主要试验仪器、试剂、分析软件与引物设计 | 第17-22页 |
| 2.2.1 主要试验仪器 | 第17-18页 |
| 2.2.2 主要试验试剂与配制方法 | 第18-19页 |
| 2.2.2.1 主要试验试剂 | 第18页 |
| 2.2.2.2 试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.2.3 分析软件 | 第19页 |
| 2.2.4 试验引物的设计 | 第19-22页 |
| 2.3 Innexin基因家族的克隆 | 第22-24页 |
| 2.3.1 Innexin基因CDS扩增 | 第22页 |
| 2.3.2 PCR产物的胶回收 | 第22-23页 |
| 2.3.3 连接 | 第23页 |
| 2.3.4 转化 | 第23页 |
| 2.3.5 菌液PCR | 第23-24页 |
| 2.3.6 质粒的提取及测序鉴定 | 第24页 |
| 2.4 小菜蛾不同发育阶段和组织cDNA合成及innexin基因表达分析 | 第24-27页 |
| 2.4.1 样品总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.4.2 cDNA第一条链的合成 | 第25-26页 |
| 2.4.3 荧光实时定量PCR | 第26-27页 |
| 2.5 CRISPR/Cas9介导的细胞内基因敲除 | 第27-30页 |
| 2.5.1 小菜蛾细胞培养 | 第27页 |
| 2.5.2 质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.5.2.1 Cas9表达质粒 | 第27页 |
| 2.5.2.2 SgRNA表达质粒 | 第27-29页 |
| 2.5.2.3 质粒纯化 | 第29页 |
| 2.5.3 细胞转染 | 第29-30页 |
| 2.6 siRNA干扰 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-46页 |
| 3.1 小菜蛾innexin基因的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2 小菜蛾innexin蛋白的主要特征及肽链三维结构预测 | 第32-38页 |
| 3.3 小菜蛾与其它昆虫innexin蛋白的进化关系 | 第38-39页 |
| 3.4 小菜蛾innexin蛋白的表达模式 | 第39-43页 |
| 3.5 CRISPR/Cas9介导的innexin 2体外敲除 | 第43-45页 |
| 3.5.1 sgRNA表达质粒 | 第43-44页 |
| 3.5.2 细胞转染效率的分析 | 第44页 |
| 3.5.3 敲除后细胞中Px016319的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.6 siRNA干扰 | 第45-46页 |
| 4 小结与展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
