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双酰胺类杀虫剂抗性与敏感品系小菜蛾差异性cDNA及鱼尼丁受体基因分析

中文摘要第1-9页
Abstract第9-11页
1 引言第11-21页
   ·双酰胺类杀虫剂的研究概况第11-13页
     ·氯虫苯甲酰胺概述第11页
     ·氟虫双酰胺的概述第11-13页
   ·小菜蛾抗双酰胺类杀虫剂的研究进展第13-14页
     ·小菜蛾的发生及危害第13页
     ·小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性研究现状第13-14页
     ·小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗药性机制研究现状第14页
   ·昆虫抗药性基因表达差异分析方法第14-19页
     ·cDNA代表性差异分析(cDNA RDA)第14-15页
     ·mRNA显示技术(DDRT)第15-16页
     ·基因表达系统分析(SAGE)第16页
     ·抑制性消减杂交(SSH)第16页
     ·cDNA微阵列(c DNA Microarray)第16-17页
     ·双向电泳技术(Two-dimensional gel electrophoresis)第17页
     ·高通量测序技术第17页
     ·几种差异表达分析方法的比较第17-19页
   ·选题目的和意义第19-20页
   ·本研究的技术路线第20-21页
2 材料与方法第21-36页
   ·供试药剂、试剂和主要仪器第21-22页
     ·供试药剂与化学试剂第21页
     ·主要分子试剂第21-22页
     ·主要仪器第22页
   ·供试昆虫与饲养第22-24页
     ·供试昆虫第22-23页
     ·试剂及培养基的配制第23-24页
   ·毒力测定及抗性选育第24页
   ·分子试验方法第24-35页
     ·小菜蛾抗性品系与敏感品系的cDNA代表性差异分析第24-32页
       ·小菜蛾RNA提取第24-25页
       ·小菜蛾总RNA纯度检测—分光光度法第25页
       ·小菜蛾总RNA完整性的鉴定—琼脂糖凝胶电泳第25-26页
       ·小菜蛾mRNA的纯化第26-27页
       ·小菜蛾双链cDNA的合成第27-28页
       ·制备检测子及扩增子第28-30页
         ·扩增cDNA第29页
         ·制备Driver第29页
         ·制备Tester第29-30页
       ·消减杂交第30页
       ·差异片段的纯化、连接转化与测序第30-32页
     ·小菜蛾基因突变的检测第32-34页
       ·小菜蛾RNA提取、逆转录及PCR扩增第32-34页
     ·不同品系小菜蛾对RyR的表达量第34-35页
       ·荧光定量PCR的引物设计第34页
       ·荧光定量PCR第34-35页
   ·数据处理与分析第35-36页
3 结果与分析第36-51页
   ·氯虫苯甲酰胺对三种小菜蛾品系/种群的毒力测定第36页
   ·氯虫苯甲酰胺和氟虫双酰胺对小菜蛾抗性选育第36-38页
   ·小菜蛾CDNA代表性差异分析第38-44页
     ·RNA的提取和cDNA的合成第38-39页
     ·cDNA RDA差异片段的获得第39-40页
     ·差异性片段的测序结果第40-42页
     ·差异性片段的核酸及蛋白质的比对结果第42-44页
   ·小菜蛾鱼尼丁受体(PXRYR)C末端突变位点的克隆及检测第44-47页
     ·基因克隆与序列比对第44-47页
   ·RYR在不同品系/种群小菜蛾中的表达量第47-51页
     ·扩增效率第47-48页
     ·不同品系小菜蛾RyR基因的表达量第48-51页
4 讨论第51-54页
   ·CDNA RDA在获得小菜蛾差异性基因中的应用第51页
   ·细胞色素P450基因的分析第51-52页
   ·鱼尼丁受体基因突变频率检测第52-53页
   ·不同品系RYR基因表达量的检测第53页
   ·有待继续研究的问题第53-54页
5 结论第54-55页
   ·小菜蛾对氯虫苯甲酰胺和氟虫双酰胺抗性发展第54页
   ·CDNA代表性差异分析第54页
   ·RYR的基因突变检测第54页
   ·不同品系RYR的基因表达量变化第54-55页
本文创新之处第55-56页
参考文献第56-62页
致谢第62-63页
攻读学位期间发表论文情况第63页

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