| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 秀丽隐杆线虫MEX-3串联KH结构域的结构和功能研究 | 第11-49页 |
| 1.1 引言 | 第11-16页 |
| 1.1.1 线虫的生殖细胞系 | 第11-12页 |
| 1.1.2 germ granule | 第12-13页 |
| 1.1.3 germ granule的形成 | 第13-14页 |
| 1.1.4 germ granule的功能 | 第14-15页 |
| 1.1.5 p granule的一般介绍 | 第15-16页 |
| 1.2 MEX-3蛋白质 | 第16-22页 |
| 1.2.1 KH结构域 | 第16-17页 |
| 1.2.2 MEX-3家族简介 | 第17-20页 |
| 1.2.3 秀丽隐杆线虫MEX-3蛋白质 | 第20-22页 |
| 1.3 材料与方法 | 第22-33页 |
| 1.3.1 ceMEX-3蛋白质边界选取及克隆 | 第22页 |
| 1.3.2 ceMEX3蛋白质目的片段的扩增 | 第22页 |
| 1.3.3 ceMEX-3蛋白质目的片段的获得 | 第22-23页 |
| 1.3.4 ceMEX-3蛋白质DNA目的片段的酶切 | 第23-24页 |
| 1.3.5 载体的制备 | 第24-25页 |
| 1.3.6 DNA目的片段与载体的连接 | 第25页 |
| 1.3.7 将连接产物转化至感受态细胞 | 第25-26页 |
| 1.3.8 菌液PCR进行单克隆鉴定 | 第26页 |
| 1.3.9 突变体的构建 | 第26-27页 |
| 1.3.10 融合蛋白质试表达 | 第27-28页 |
| 1.3.11 融合蛋白质的表达 | 第28页 |
| 1.3.12 His_6-tag融合蛋白质的纯化 | 第28-30页 |
| 1.3.13 GST-tag融合蛋白质的纯化 | 第30页 |
| 1.3.14 ~(15)N标记融合蛋白质的表达纯化 | 第30-31页 |
| 1.3.15 ~(15)N-~1H HSQC谱图 | 第31页 |
| 1.3.16 ITC进行相互作用的验证 | 第31-32页 |
| 1.3.17 晶体生长 | 第32-33页 |
| 1.4 实验结果 | 第33-47页 |
| 1.4.1 ceMEX-3蛋白质的边界选取 | 第33-35页 |
| 1.4.2 ceMEX-3蛋白质中串联KH结构域的克隆 | 第35-36页 |
| 1.4.3 ceMEX-3蛋白质边界64-235基因序列的突变缺失 | 第36-37页 |
| 1.4.4 ceMEX-3蛋白质其他边界的克隆 | 第37页 |
| 1.4.5 ceMEX-3蛋白质边界64-235,77-235的表达纯化 | 第37-40页 |
| 1.4.6 ceMEX-3蛋白质其他边界的表达纯化 | 第40-44页 |
| 1.4.7 ceMEX-3蛋白质边界159-235及边界77-235的~(15)N-~1H HSQC谱图 | 第44-46页 |
| 1.4.8 ceMEX-3蛋白质与RNA相互作用的验证 | 第46页 |
| 1.4.9 ceMEX-3蛋白质晶体筛选 | 第46-47页 |
| 1.5 讨论 | 第47-49页 |
| 第2章 拟南芥APUM5 PUF结构域的结构和功能研究 | 第49-63页 |
| 2.1 研究背景 | 第49-54页 |
| 2.1.1 PUF类蛋白质的一般介绍 | 第49-50页 |
| 2.1.2 PUF类蛋白质特异性识别RNA序列 | 第50-51页 |
| 2.1.3 PUF类蛋白质的功能 | 第51-53页 |
| 2.1.4 APUM5的功能 | 第53-54页 |
| 2.2 材料与方法 | 第54-55页 |
| 2.2.1 拟南芥APUM5 PUF结构域的克隆 | 第54页 |
| 2.2.2 拟南芥APUM5 PUF结构域的表达和纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.3 动态光散射实验 | 第55页 |
| 2.2.4 拟南芥APUM5 PUF结构域与CMV 3'UTR相互作用的验证 | 第55页 |
| 2.2.5 晶体生长 | 第55页 |
| 2.3 实验结果 | 第55-61页 |
| 2.3.1 拟南芥APUM5 PUF结构域的克隆 | 第55-56页 |
| 2.3.2 拟南芥APUM5 PUF结构域的表达纯化 | 第56-57页 |
| 2.3.3 拟南芥APUM5 PUF结构域稳定性实验 | 第57-58页 |
| 2.3.4 拟南芥APUM5 PUF结构域与CMV 3'UTR相互作用的验证 | 第58-59页 |
| 2.3.5 拟南芥APUM5 PUF结构域的晶体筛选及优化 | 第59-61页 |
| 2.4 讨论 | 第61-63页 |
| 第3章 精氨酸甲基转移酶PRMT9的结构和功能研究 | 第63-79页 |
| 3.1 研究背景 | 第63-67页 |
| 3.1.1 精氨酸的甲基化 | 第63-64页 |
| 3.1.2 PRMT家族简介 | 第64-66页 |
| 3.1.3 PRMT9的一般介绍 | 第66-67页 |
| 3.2 材料方法 | 第67-73页 |
| 3.2.1 重组pFastBac~(TM)质粒的构建 | 第67-68页 |
| 3.2.2 重组Bacmid的构建 | 第68页 |
| 3.2.3 重组Bacmid的鉴定 | 第68-69页 |
| 3.2.4 重组Bacmid的提取 | 第69页 |
| 3.2.5 昆虫细胞的培养 | 第69-70页 |
| 3.2.6 重组杆状病毒的获得 | 第70-71页 |
| 3.2.7 目的蛋白质的表达纯化 | 第71-72页 |
| 3.2.8 GST pull down验证相互作用 | 第72-73页 |
| 3.3 实验结果 | 第73-79页 |
| 3.3.1 人源PRMT9及斑马鱼PRMT9大肠杆菌体外表达 | 第73-74页 |
| 3.3.2 斑马鱼PRMT9蛋白质昆虫细胞表达 | 第74-77页 |
| 3.3.3 斑马鱼PRMT9蛋白质与SF3B2蛋白质相互作用的验证 | 第77-78页 |
| 3.3.4 斑马鱼PRMT9蛋白质晶体的筛选 | 第78-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79页 |
| 4 总结与展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
