| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 | 第12-48页 |
| 第一章 CRISPR-Cas9表达载体的构建 | 第12-25页 |
| 1 材料 | 第13页 |
| ·主要仪器设备 | 第13页 |
| ·试剂、耗材及材料 | 第13页 |
| 2 方法 | 第13-18页 |
| ·分离小鼠胎儿成纤维细胞 | 第13-14页 |
| ·小鼠FGF21基因CRISPR-Cas9系统的设计与构建 | 第14-17页 |
| ·FGF21基因中靶位点设计 | 第14-15页 |
| ·gRNA表达载体构建 | 第15-16页 |
| ·引物设计及细胞基因组模板的制备 | 第16-17页 |
| ·Surveyor突变检测试剂盒进行突变效率检测 | 第17-18页 |
| ·CRISPR-Cas9载体体外转录 | 第18页 |
| 3 结果 | 第18-21页 |
| ·分离与培养小鼠胎儿成纤维细胞的结果 | 第18-19页 |
| ·构建gRNA表达载体的结果 | 第19-20页 |
| ·靶位点gRNA设计的结果 | 第19页 |
| ·gRNA片段扩增结果 | 第19-20页 |
| ·Surveyor突变检测试剂盒检测结果 | 第20-21页 |
| ·CRISPR-Cas9载体准备 | 第21页 |
| 4 讨论 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二章 利用CRISPR-Cas9技术制备FGF21基因敲除小鼠 | 第25-33页 |
| 1. 材料与仪器 | 第26-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·主要材料、试剂及耗材 | 第26页 |
| ·准备结扎公鼠及假孕母鼠 | 第26页 |
| ·超数排卵与受精卵的采集 | 第26-27页 |
| ·显微注射 | 第27页 |
| ·胚胎移植 | 第27页 |
| ·FGF21全身性敲除小鼠的鉴定 | 第27-29页 |
| ·F0代小鼠基因组的提取 | 第27-28页 |
| ·F0代小鼠PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29-30页 |
| ·FGF21基因敲除小鼠的测序鉴定 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第三章 FGF21基因敲除阳性小鼠的检测 | 第33-47页 |
| 1. 材料和方法 | 第34-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·主要材料、试剂及耗材 | 第34页 |
| ·人工脱毛——诱导毛发进入生长期 | 第34-35页 |
| ·石蜡切片 | 第35页 |
| ·H&E染色 | 第35-36页 |
| ·Real-time PCR检测 | 第36-38页 |
| ·小鼠皮肤组织中RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·小鼠皮肤组织的Real-time PCR | 第37-38页 |
| ·Western blotting检测 | 第38-39页 |
| ·数据分析 | 第39-40页 |
| 2. 结果 | 第40-44页 |
| ·小鼠皮肤组织中FGF21的蛋白质表达水平检测 | 第40页 |
| ·观察小鼠皮肤毛发生长变化 | 第40页 |
| ·石蜡切片 | 第40-42页 |
| ·小鼠毛囊发育相关基因mRNA表达水平 | 第42-43页 |
| ·小鼠毛囊发育相关基因蛋白质水平表达情况 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 第二部分 综述部分 FGF21及FGF21相关信号通路的研究进展 | 第48-61页 |
| 1 FGFS家族 | 第48-49页 |
| ·FGF家族及其主要结构 | 第48-49页 |
| ·FGFs的主要功能 | 第49页 |
| 2 | 第49-54页 |
| ·FGF家族的受体及其类型 | 第49-50页 |
| ·FGF及其受体生理作用及相关信号通路 | 第50-53页 |
| ·FGF及其受体对血管生成及肿瘤的作用 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第62页 |
