| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-21页 |
| 缩略词表 | 第21-23页 |
| 引言 | 第23-30页 |
| 第一部分 基因RPS15A RNAi及其过表达慢病毒载体的构建与病毒包装 | 第30-61页 |
| 一、前言 | 第30-31页 |
| 二、材料与方法 | 第31-48页 |
| ·材料 | 第31-35页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·主要细胞株与载体 | 第32-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-48页 |
| ·构建靶向人基因RPS15A的shRNA慢病毒干扰载体 | 第35-41页 |
| ·构建过表达基因RPS15A的慢病毒表达载体 | 第41-45页 |
| ·重组慢病毒Lenti-shRPS15A和Lenti-oeRPS15A的包装 | 第45-48页 |
| 三、实验结果 | 第48-57页 |
| ·pLenti-shRPS15A慢病毒载体质粒的构建和鉴定 | 第48-51页 |
| ·pLenti-shRPS15A慢病毒载体酶切结果 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆pLenti-shRPS15A测序结果 | 第50-51页 |
| ·pLenti-oeRPS15A慢病毒过表达载体质粒的构建和鉴定 | 第51-57页 |
| ·目的基因RPS15A的扩增 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆PCR鉴定 | 第52页 |
| ·阳性克隆pLenti-oeRPS15A测序结果 | 第52-55页 |
| ·慢病毒滴度测定 | 第55-57页 |
| 四、讨论 | 第57-60页 |
| 五、结论 | 第60-61页 |
| 第二部分 敲减及过表达RPS15A基因后白血病细胞增殖和凋亡的改变 | 第61-86页 |
| 一、前言 | 第61-62页 |
| 二、材料与方法 | 第62-75页 |
| ·材料 | 第62-65页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要细胞株 | 第63-64页 |
| ·主要试剂的配制 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-75页 |
| ·细胞培养 | 第65-67页 |
| ·慢病毒在目的细胞中的感染效率检测 | 第67页 |
| ·qPCR检测检测目的基因mRNA表达 | 第67-70页 |
| ·Western blot检测目的蛋白表达 | 第70-73页 |
| ·MTT法检测细胞增殖 | 第73-74页 |
| ·PI检测细胞周期 | 第74页 |
| ·Annexin V-APC/7-AAD双染色检测细胞凋亡 | 第74-75页 |
| ·统计学分析 | 第75页 |
| 三、实验结果 | 第75-82页 |
| ·慢病毒Lenti-shRPS15A和Lenti-oeRPS15A感染U937细胞的情况 | 第75-76页 |
| ·qPCR检测慢病毒感染U937细胞后RPS15A mRNA水平表达 | 第76-78页 |
| ·Western blot检测慢病毒感染U937细胞后RPS15A蛋白水平表达 | 第78页 |
| ·MTT法检测病毒感染U937细胞的增殖情况 | 第78-79页 |
| ·流式分析法检测病毒感染U937细胞后的细胞周期的情况 | 第79-80页 |
| ·流式细胞术检测RNAi慢病毒感染U937细胞后细胞凋亡的情况 | 第80-82页 |
| 四、讨论 | 第82-85页 |
| 五、结论 | 第85-86页 |
| 第三部分 RPS15A对基因表达谱变化的研究 | 第86-113页 |
| 一、前言 | 第86-87页 |
| 二、材料与方法 | 第87-93页 |
| ·材料 | 第87-89页 |
| ·细胞 | 第87-88页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第88页 |
| ·主要仪器 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-93页 |
| ·细胞培养 | 第89页 |
| ·抽提总RNA | 第89页 |
| ·RNA质量检测 | 第89-90页 |
| ·RNA的纯化 | 第90页 |
| ·总RNA的放大和标记 | 第90-91页 |
| ·芯片杂交 | 第91页 |
| ·芯片洗涤 | 第91-92页 |
| ·芯片扫描 | 第92页 |
| ·数据分析和统计学方法 | 第92-93页 |
| 三、实验结果 | 第93-110页 |
| ·质检结果 | 第93-94页 |
| ·数据分析 | 第94-110页 |
| ·差异表达谱分析 | 第94-100页 |
| ·差异基因验证 | 第100页 |
| ·差异基因的基因本体论(Gene ontology,GO)富集分析 | 第100-107页 |
| ·差异基因的通路(pathway)富集分析 | 第107-110页 |
| 四、讨论 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 综述 | 第122-134页 |
| 参考文献 | 第129-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第135-136页 |
| 附件 | 第136-149页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第149页 |
