| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1. 引言 | 第13-20页 |
| ·硒的发现与研究 | 第13页 |
| ·硒蛋白的合成及调控 | 第13-14页 |
| ·硒蛋白W | 第14-18页 |
| ·SelW 的组织分布 | 第15页 |
| ·SelW 的基因结构 | 第15-16页 |
| ·SelW 的氨基酸序列 | 第16页 |
| ·SelW 蛋白结构 | 第16-17页 |
| ·食物硒对SelW mRNA 的调控 | 第17页 |
| ·SelW 的功能 | 第17-18页 |
| ·杂交瘤单克隆抗体技术 | 第18-19页 |
| ·实验的目的意义 | 第19-20页 |
| 2. 试验方法与材料 | 第20-39页 |
| ·试验试剂与材料 | 第20-23页 |
| ·试验试剂 | 第20页 |
| ·菌种与载体 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂的配制 | 第20-23页 |
| ·仪器设备 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·目的基因原核表达载体构建 | 第23-27页 |
| ·鸡SelW cDNA 原核表达载体构建 | 第27-30页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第31-36页 |
| ·抗原乳剂的制备 | 第31-32页 |
| ·动物免疫 | 第32页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体的特异性鉴定 | 第33-34页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第34页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第34-35页 |
| ·脾淋巴细胞的准备 | 第35页 |
| ·细胞融合 | 第35-36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化—有限稀释法 | 第36页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第36-37页 |
| ·体外培养法 | 第36页 |
| ·体内诱生腹水法 | 第36-37页 |
| ·单克隆抗体的部分特性鉴定 | 第37-39页 |
| ·单克隆抗体上清及腹水效价测定 | 第37页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第37页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数鉴定 | 第37-38页 |
| ·单克隆抗体分泌抗体稳定性鉴定 | 第38页 |
| ·单克隆抗体的特异性分析 | 第38页 |
| ·单克隆抗体亲和度测定 | 第38-39页 |
| 3. 试验结果与分析 | 第39-52页 |
| ·突变型鸡Sel W cDNA 的制备 | 第39-41页 |
| ·重叠延伸PCR | 第39-40页 |
| ·突变型鸡SelW cDNA 基因的克隆、鉴定及序列测定与分析 | 第40-41页 |
| ·鸡Sel W cDNA 原核表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·纯化PCR 扩增产物和载体pGEX-6P-1 双酶切 | 第41页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第41-43页 |
| ·重组蛋白的表达与鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组融合蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| ·表达条件的常规优化 | 第43页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第43-44页 |
| ·凝血酶切除GST 标签并纯化目的蛋白 | 第44-45页 |
| ·纯化后目的蛋白浓度 | 第45页 |
| ·间接ELISA 反应条件的优化 | 第45-47页 |
| ·抗原与血清工作浓度的确定 | 第45页 |
| ·酶标抗体工作浓度的确定 | 第45-46页 |
| ·血清作用时间的确定 | 第46页 |
| ·酶标抗体作用时间的确定 | 第46页 |
| ·封闭液与其封闭时间的确定 | 第46-47页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第47页 |
| ·多克隆抗体的特异性鉴定 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞系的建立及部分特性鉴定结果 | 第48-52页 |
| ·细胞融合率 | 第48页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞株分泌抗体的稳定性检测结果 | 第48-49页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定结果 | 第49页 |
| ·单克隆抗体染色体计数结果 | 第49-50页 |
| ·单克隆抗体的特异性分析 | 第50页 |
| ·单克隆抗体亲和度测定 | 第50-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-62页 |
| ·目的基因的克隆 | 第52页 |
| ·表达载体的选择 | 第52-53页 |
| ·宿主表达菌的选择 | 第53页 |
| ·表达条件的常规优化 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的表达纯化 | 第54页 |
| ·间接ELISA 反应条件的优化 | 第54-56页 |
| ·抗原制备 | 第56页 |
| ·实验动物的挑选和免疫 | 第56-57页 |
| ·细胞融合 | 第57-58页 |
| ·单克隆细胞株筛选 | 第58页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第58-59页 |
| ·污染的预防和排除 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体的生物学特性 | 第60-62页 |
| ·单克隆抗体效价 | 第60页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第60页 |
| ·单克隆抗体大量制备方法的选择 | 第60页 |
| ·单克隆抗体特异性分析 | 第60-61页 |
| ·单克隆抗体亲和度的测定 | 第61-62页 |
| 5. 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |