| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-11页 |
| 材料与方法 | 第11-26页 |
| 1. 人单核细胞系THP-1培养、传代、冻存 | 第11-12页 |
| ·细胞培养和传代 | 第11页 |
| ·细胞冻存和复苏 | 第11-12页 |
| 2. 药物刺激THP-1细胞 | 第12-14页 |
| ·DEX配制 | 第13页 |
| ·LPS配制 | 第13页 |
| ·细胞分组接种 | 第13页 |
| ·药物刺激 | 第13页 |
| ·样本收集 | 第13-14页 |
| 3. 流式细胞仪检测膜微粒 | 第14-18页 |
| ·仪器校准和参数设定 | 第14-17页 |
| ·待测样品染色准备 | 第17页 |
| ·样品检测和分析 | 第17-18页 |
| 4. 一期法凝血时间测总TF促凝血活性 | 第18页 |
| ·冻融法裂解膜结构 | 第18页 |
| ·一期法测凝血时间 | 第18页 |
| 5. ELISA测定膜微粒相关的TF活性 | 第18-21页 |
| ·试剂配制 | 第19页 |
| ·96孔酶标板设计 | 第19-20页 |
| ·ELISA | 第20-21页 |
| 6. PCR测定不同药物刺激THP-1的TF mRNA水平 | 第21-24页 |
| ·提取细胞总RNA | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测总RNA | 第22页 |
| ·mRNA逆转录成cDNA | 第22页 |
| ·PCR检测TF mRNA | 第22-23页 |
| ·Realtime-PCR定量检测TF-mRNA | 第23-24页 |
| 7 数据分析与统计处理 | 第24-26页 |
| 实验结果 | 第26-41页 |
| 1. 流式细胞仪检测总MPs及TF(+)-MPs | 第26-31页 |
| ·激素组膜微粒 | 第26-28页 |
| ·激素和内毒素共刺激组膜微粒 | 第28-31页 |
| 2. 一期法凝血时间测总TF促凝血活性 | 第31-33页 |
| ·激素组不同刺激时间和浓度下凝血时间 | 第31-32页 |
| ·激素组与LPS共刺激组不同刺激时间和浓度下凝血时间 | 第32-33页 |
| 3. ELISA测定膜微粒相关的TF活性 | 第33-36页 |
| ·测定FXa标准曲线 | 第33-35页 |
| ·激素刺激组MP相关性TF活性 | 第35-36页 |
| ·激素和LPS共刺激组MP相关性TF活性 | 第36页 |
| 4. PCR测定TF-mRNA | 第36-40页 |
| ·提取细胞总RNA | 第36-37页 |
| ·RT-PCR | 第37页 |
| ·Realtime-PCR | 第37-40页 |
| 5. 激素刺激后促凝血作用与膜微粒及TF-mRNA相关性分析 | 第40-41页 |
| 实验讨论 | 第41-45页 |
| 1. 实验对象选择、质量控制 | 第41-42页 |
| 2. 总膜微粒和TF阳性膜微粒 | 第42页 |
| 3. 上清液的总促凝活性 | 第42-43页 |
| 4. 膜微粒表面的TF的活性 | 第43-44页 |
| 5. 激素在转录水平的作用 | 第44页 |
| 6. 促凝活性与膜微粒相关 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 英文缩略词表 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 综述：股骨头坏死动物模型的建立与选择 | 第52-60页 |
| 概述 | 第52页 |
| 一、先天基因缺陷造成的股骨头坏死 | 第52页 |
| 二、手术截断血供造成的股骨头坏死 | 第52-53页 |
| 三、皮质类固醇诱导的股骨头坏死 | 第53-54页 |
| 四、酒精诱导的股骨头坏死 | 第54-55页 |
| 五、微血栓和高凝状态诱导的股骨头坏死 | 第55-56页 |
| 六、免疫反应诱导的骨坏死 | 第56页 |
| 七、物理损伤造成的股骨头坏死 | 第56页 |
| 八、诱导股骨头坏死方法和动物的选择 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
