| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-27页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎 | 第15页 |
| ·病原学 | 第15-16页 |
| ·流行病学 | 第16-17页 |
| ·致病机理及其危害 | 第17-19页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第18-19页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子 | 第19-22页 |
| ·溶血毒素（Apx） | 第19-20页 |
| ·外膜蛋白（Omp） | 第20-21页 |
| ·荚膜多糖（CPS） | 第21页 |
| ·脂多糖（LPS） | 第21-22页 |
| ·其他毒力因子 | 第22页 |
| ·诊断方法 | 第22-24页 |
| ·病原学方法 | 第22页 |
| ·血清型方法 | 第22-23页 |
| ·分子学诊断方法 | 第23-24页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的防制 | 第24页 |
| ·研究目的及意义 | 第24-27页 |
| 第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR 检测方法的建立、药敏试验及 MIC 值的测定 | 第27-39页 |
| ·PCR 诊断方法的建立 | 第27-30页 |
| ·培养基及菌株 | 第27页 |
| ·酶类及主要试剂 | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·App 基因组提取 | 第28页 |
| ·PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·App PCR 特异性检测 | 第29页 |
| ·App PCR 敏感性检测 | 第29-30页 |
| ·重复性试验 | 第30页 |
| ·药敏试验及 MIC 值的测定 | 第30-32页 |
| ·培养基及实验菌株 | 第30页 |
| ·主要器材 | 第30页 |
| ·试验用药及药敏片制备 | 第30页 |
| ·药品原液制备及保存 | 第30-31页 |
| ·菌株的活化及菌液制备 | 第31页 |
| ·药敏试验 | 第31页 |
| ·MIC 的测定 | 第31页 |
| ·结果判定 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-36页 |
| ·App 标准菌株 PCR 扩增 | 第32页 |
| ·App PCR 扩增特异性试验 | 第32-33页 |
| ·App 的敏感性试验 | 第33-34页 |
| ·重复性试验 | 第34页 |
| ·建立的 PCR 方法对临床分离菌株的鉴定 | 第34页 |
| ·药敏试验 | 第34-35页 |
| ·MIC 的测定结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| ·PCR 诊断方法的建立 | 第36-37页 |
| ·药敏试验及 MIC 值的测定 | 第37-39页 |
| 第三章 毒力因子 ApxⅠA、ApxⅡA、OmpD15 基因片段的克隆 | 第39-49页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·菌株和载体 | 第39页 |
| ·仪器及试剂 | 第39-40页 |
| ·工具酶及主要试剂配制 | 第40页 |
| ·ApxⅠA、ApxⅡA、OmpD15 片段的扩增与克隆 | 第40-44页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第40页 |
| ·基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物电泳及纯化 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物与 pMD18-T 载体的连接 | 第42页 |
| ·感受态细胞制备 | 第42-43页 |
| ·连接产物的转化和阳性菌落的鉴定 | 第43页 |
| ·阳性克隆质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆质粒序列测定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-48页 |
| ·ApxⅠC、ApxⅡA、 OmpD15 基因片段的克隆结果 | 第44-45页 |
| ·测序结果 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 OmpD15 的原核表达及其抗原性分析 | 第49-65页 |
| ·OmpD15 基因的原核表达 | 第49-55页 |
| ·工具酶及主要试剂配制 | 第49-50页 |
| ·OmpD15 的基因扩增 | 第50页 |
| ·目的片段和载体的酶切、电泳及回收 | 第50-51页 |
| ·基因 OmpD15 的连接与转化 | 第51页 |
| ·重组表达质粒的提取与酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒的诱导表达 | 第52页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第52-53页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物初步纯化 | 第53-54页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物的抗原性分析 | 第54-55页 |
| ·动物实验 | 第55-57页 |
| ·实验材料及实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·最小致死量（MLD）的测定 | 第55-56页 |
| ·抗体的监测 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57-62页 |
| ·OmpD15 基因的扩增 | 第57页 |
| ·重组表达质粒的提取与酶切鉴定 | 第57-58页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第58-59页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物初步纯化 | 第59-60页 |
| ·pET32a-OmpD15 重组表达质粒表达产物的抗原性分析 | 第60-61页 |
| ·最小致死量（MLD）的测定 | 第61页 |
| ·抗体的监测 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第79-80页 |
