| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 Nrf2与Nrf2/ARE信号转导通路 | 第13-19页 |
| ·核转录因子Nrf2 | 第13-14页 |
| ·Nrf2的Keap1依赖型调控方式 | 第14-15页 |
| ·Nrf2的Keap1非依赖型调控方式 | 第15-18页 |
| ·Nrf2/ARE防御通路中的效应基因 | 第18-19页 |
| 2 Nrf2与病毒相关性研究 | 第19-24页 |
| ·病毒感染诱导的氧化应激 | 第20-21页 |
| ·病毒感染对Nrf2表达的影响 | 第21-23页 |
| ·Nrf2的表达对病毒感染的影响 | 第23-24页 |
| 3 Nrf2的小分子激活剂 | 第24-26页 |
| 4 抗氧化策略在抗病毒感染中的应用 | 第26-27页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 黑头软口鲦Nrf2基因cDNA克隆与系统进化分析 | 第28-50页 |
| 1 材料与方法 | 第28-41页 |
| ·细胞、菌株和载体 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·EPC细胞复苏及传代培养 | 第30页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2基因cDNA核心片段的克隆 | 第30-36页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·EPC细胞总RNA提取 | 第30-31页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第31-32页 |
| ·巢式PCR扩增Nrf2基因的核心片段 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| ·PCR产物的T载体克隆与测序 | 第34-36页 |
| ·Nrf2基因cDNA 3’末端的克隆 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·3’-RACE扩增Nrf2基因cDNA3’末端 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的T载体克隆与测序 | 第37页 |
| ·Nrf2基因cDNA5’末端的克隆 | 第37-41页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·5’-RACE扩增Nrf2基因cDNA 5’末端 | 第37-40页 |
| ·PCR产物的T载体克隆与测序 | 第40-41页 |
| ·Nrf2基因序列分析 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-47页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2基因cDNA核心片段的克隆和序列测定 | 第41-42页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2基因cDNA 3’-末端的克隆和序列测定 | 第42页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2基因cDNA 5’-末端的克隆和序列测定 | 第42页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2基因cDNA序列分析 | 第42-44页 |
| ·黑头软口鲦Nrf2的同源性及系统进化分析 | 第44-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 4 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 SVCV感染与Nrf2表达策略分析 | 第50-62页 |
| 1 材料与方法 | 第50-57页 |
| ·细胞和病毒 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·实时荧光定量分析SVCV感染EPC细胞在不同时相下Nrf2的基因表达水平 | 第51-54页 |
| ·病毒感染 | 第51页 |
| ·RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·反转录 | 第52页 |
| ·半定量PCR检测SVCV-G mRNA的表达 | 第52-53页 |
| ·Real-time PCR检测SVCV感染EPC细胞在不同时相下Nrf2 mRNA的转录情况 | 第53-54页 |
| ·Western blot分析SVCV感染EPC细胞在不同时相下Nrf2的蛋白表达水平 | 第54-57页 |
| ·病毒感染 | 第54页 |
| ·细胞总蛋白的样品制备 | 第54-55页 |
| ·细胞核蛋白的样品制备 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE及Western blot分析 | 第55-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-59页 |
| ·半定量PCR检测SVCV-G基因的表达 | 第57页 |
| ·SVCV感染上调Nrf2的转录水平 | 第57-58页 |
| ·SVCV感染诱导Nrf2在细胞核内的累积 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-60页 |
| 4 小结 | 第60-62页 |
| 第四章 Nrf2的激活对下游效应基因的调控及对SVCV感染的影响 | 第62-74页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| ·细胞和病毒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·MTT法测定药物毒性 | 第63页 |
| ·激活剂对Nrf2及其下游效应基因转录和表达的影响 | 第63-64页 |
| ·FRAP法测定激活剂处理后的细胞总抗氧化能力 | 第64页 |
| ·激活剂预处理后的病毒感染及SVCV病毒G基因的定量检测 | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-71页 |
| ·MTT法测定药物毒性 | 第65-66页 |
| ·激活剂对Nrf2及其下游效应基因转录和表达的影响 | 第66-70页 |
| ·FRAP法测定激活剂处理后的细胞总抗氧化能力 | 第70页 |
| ·激活剂预处理后的病毒感染及SVCV病毒G基因的定量检测 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-93页 |
| 附表Ⅰ：实验中主要试剂的配制方法 | 第93-95页 |
| 附表Ⅱ：硕士期间发表的论文 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
