| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 英文缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·萜类化合物 | 第11页 |
| ·萜类化合物的生物活性 | 第11-12页 |
| ·萜类化合物合成途径 | 第12-15页 |
| ·甲羟戊酸途径 | 第12-13页 |
| ·2-甲基-D-赤藓糖-4-磷酸途径 | 第13-15页 |
| ·1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶 | 第15-20页 |
| ·dxs基因的特性 | 第15-16页 |
| ·DXS的晶体结构 | 第16-17页 |
| ·DXS的转酮酶活性 | 第17页 |
| ·DXS作为转酮酶的作用机制 | 第17-18页 |
| ·与DXS转酮酶活性相关的氨基酸残基 | 第18-19页 |
| ·DXS的磷酸丙糖异构化活性 | 第19-20页 |
| ·定点突变技术 | 第20页 |
| ·本课题研究的意义 | 第20-22页 |
| 第二章 突变体基因的制备 | 第22-28页 |
| ·材料与仪器 | 第22-23页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·试剂配方 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·突变位点的设计 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·质粒模板的制备 | 第25页 |
| ·反向PCR | 第25页 |
| ·DpnI酶消化模板质粒 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶检测 | 第25-26页 |
| ·PCR产物自身环化 | 第26页 |
| ·热击转化 | 第26页 |
| ·突变质粒测序 | 第26页 |
| ·实验结果 | 第26-27页 |
| ·反向PCR结果 | 第26-27页 |
| ·突变质粒测序结果 | 第27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 第三章 突变体的制备及活性检测 | 第28-43页 |
| ·材料与仪器 | 第28-31页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂配方 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·DXS的诱导表达 | 第31页 |
| ·亲和层析纯化DXS | 第31页 |
| ·DXS表达纯化的SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| ·酶标法测定DXS蛋白浓度 | 第32页 |
| ·纸色谱法检测DXS转酮酶活性 | 第32-33页 |
| ·柱前衍生-高效液相色谱法检测DXS活性 | 第33-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·DXS诱导表达纯化结果 | 第35-36页 |
| ·DXS浓度测定结果 | 第36页 |
| ·DXS转酮酶活性检测结果 | 第36-39页 |
| ·DXS磷酸丙糖异构化活性检测结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-43页 |
| 第四章 pGEx4T-H49Qdxs重组质粒的构建表达纯化及活性检测 | 第43-54页 |
| ·材料与仪器 | 第43-44页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·引物 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要试剂配方 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·H49Qdxs基因的扩增 | 第44-45页 |
| ·外源基因和载体双酶切反应 | 第45页 |
| ·连接反应 | 第45页 |
| ·热击转化 | 第45页 |
| ·重组质粒的验证 | 第45页 |
| ·重组质粒的表达 | 第45-46页 |
| ·亲和层析纯化H49Q DXS-GST | 第46页 |
| ·DXS重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第46页 |
| ·酶标法(Bradford试剂)测定DXS蛋白浓度 | 第46页 |
| ·纸色谱法检测H49Q DXS-GST活性 | 第46-47页 |
| ·柱前衍生-高效液相色谱法检测H49Q DXS-GST活性 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-52页 |
| ·H49Qdxs基因扩增结果 | 第48页 |
| ·外源基因和载体双酶切结果 | 第48-49页 |
| ·重组质粒酶切验证结果 | 第49页 |
| ·H49Q DXS-GST表达纯化结果 | 第49-50页 |
| ·H49Q DXS-GST浓度测定结果 | 第50页 |
| ·纸色谱法检测H49Q DXS-GST转酮酶活性结果 | 第50-51页 |
| ·柱前衍生-HPLC法检测H49Q DXS-GST转酮酶活性结果 | 第51-52页 |
| ·H49Q DXS-GST磷酸丙糖异构化活性检测结果 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 DXS突变体稳态动力学参数的测定 | 第54-60页 |
| ·材料与仪器 | 第54页 |
| ·所需试剂 | 第54页 |
| ·主要试剂配方 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·DXS的稳态动力学参数 | 第54-55页 |
| ·NADPH的标准曲线 | 第55页 |
| ·酶联紫外法 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-59页 |
| ·NADPH的标准曲线 | 第56-57页 |
| ·DXS稳态动力学参数测定结果 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
