中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-23页 |
·高温对昆虫生长发育、生殖的影响 | 第11-12页 |
·高温对昆虫存活率的影响 | 第12-13页 |
·高温对昆虫影响的内在机理 | 第13-19页 |
·NADK~+激酶基因 | 第19-20页 |
·高温对家蚕的影响 | 第20-21页 |
·研究家蚕耐高温机理的意义 | 第21-23页 |
第二章 研究目的与内容 | 第23-25页 |
1 目的与意义 | 第23页 |
2 研究内容 | 第23页 |
3 研究技术路线 | 第23-25页 |
第三章 主要试剂与常用实验方法 | 第25-34页 |
1 主要试剂与材料 | 第25-28页 |
·菌株与蚕品种 | 第25页 |
·主要生化试剂 | 第25-26页 |
·主要试剂盒 | 第26页 |
·Marker | 第26页 |
·培养基 | 第26页 |
·常用溶液的配制 | 第26-27页 |
·生物信息学资源及分析软件 | 第27-28页 |
2 主要仪器设备 | 第28页 |
3 常用实验方法 | 第28-34页 |
·总 RNA 的提取 | 第28-29页 |
·基因组 DNA 消化 | 第29页 |
·RNA 反转录 | 第29页 |
·PCR 扩增反应 | 第29-30页 |
·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
·PCR 产物的回收 | 第30页 |
·3′-RACE 反应 | 第30页 |
·5′-RACE 反应 | 第30页 |
·连接反应 | 第30-31页 |
·感受态细胞的制备 | 第31页 |
·重组 DNA 的转化 | 第31-32页 |
·重组质粒的筛选 | 第32页 |
·质粒 DNA 的抽提 | 第32页 |
·限制性内切酶反应 | 第32页 |
·实时荧光定量 PCR(Real time PCR) | 第32-33页 |
·BCA 法测蛋白浓度 | 第33-34页 |
第四章 家蚕 NADK 基因的克隆及相关研究 | 第34-46页 |
1 材料与方法 | 第34-37页 |
·实验动物材料 | 第34页 |
·引物设计 | 第34页 |
·家蚕总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA | 第34页 |
·RACE 反应 | 第34-35页 |
·NADK 基因的 RNAi 处理 | 第35-36页 |
·辅酶Ⅰ含量测定 | 第36页 |
·辅酶Ⅱ含量测定 | 第36页 |
·还原型谷胱甘肽测定方法 | 第36-37页 |
·过氧化氢测定方法 | 第37页 |
2 结果与分析 | 第37-45页 |
·家蚕 BmNADK 基因 cDNA 的克隆及分析 | 第37-40页 |
·家蚕 5 龄不同发育时间点脂肪体和中肠组织中 BmNADK 的表达分析 | 第40-41页 |
·RNAi 对家蚕 NADK 基因的表达及其相关氧化还原代谢的影响 | 第41-45页 |
3 讨论 | 第45-46页 |
第五章 高温对家蚕 NADK 基因表达的影响 | 第46-57页 |
1 材料与方法 | 第46-47页 |
·实验动物材料 | 第46页 |
·高温处理方法及取材 | 第46页 |
·总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA | 第46-47页 |
·引物的设计 | 第47页 |
·基因表达分析 | 第47页 |
2 结果与分析 | 第47-55页 |
·34℃高温连续处理后,家蚕雌雄之间 NADK 基因表达的差异 | 第47-50页 |
·42℃高温瞬间处理 3h 对家蚕 NADK 基因表达的影响 | 第50-52页 |
·34℃连续性处理家蚕 7532 和皓月,其 NADK 基因的表达差异 | 第52-55页 |
3 讨论 | 第55-57页 |
第六章 综合结论和展望 | 第57-59页 |
1 家蚕 NADK 基因的下调使得 NADPH、GSH 等物质含量活性下降 | 第57页 |
2 家蚕 NADK 基因表达和高温应激有关 | 第57页 |
3 不同家蚕品种对高温的应激反应在 NADK 基因表达方面存在差异 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-67页 |
研究生期间发表的文章及成果 | 第67-69页 |
研究生期间科研资助项目 | 第69-71页 |
附录 | 第71-73页 |
致谢 | 第73-74页 |