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家蚕BmNADK基因的克隆分析及其与家蚕高温应激反应的相关研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 文献综述第11-23页
   ·高温对昆虫生长发育、生殖的影响第11-12页
   ·高温对昆虫存活率的影响第12-13页
   ·高温对昆虫影响的内在机理第13-19页
   ·NADK~+激酶基因第19-20页
   ·高温对家蚕的影响第20-21页
   ·研究家蚕耐高温机理的意义第21-23页
第二章 研究目的与内容第23-25页
 1 目的与意义第23页
 2 研究内容第23页
 3 研究技术路线第23-25页
第三章 主要试剂与常用实验方法第25-34页
 1 主要试剂与材料第25-28页
   ·菌株与蚕品种第25页
   ·主要生化试剂第25-26页
   ·主要试剂盒第26页
   ·Marker第26页
   ·培养基第26页
   ·常用溶液的配制第26-27页
   ·生物信息学资源及分析软件第27-28页
 2 主要仪器设备第28页
 3 常用实验方法第28-34页
   ·总 RNA 的提取第28-29页
   ·基因组 DNA 消化第29页
   ·RNA 反转录第29页
   ·PCR 扩增反应第29-30页
   ·DNA 琼脂糖凝胶电泳第30页
   ·PCR 产物的回收第30页
   ·3′-RACE 反应第30页
   ·5′-RACE 反应第30页
   ·连接反应第30-31页
   ·感受态细胞的制备第31页
   ·重组 DNA 的转化第31-32页
   ·重组质粒的筛选第32页
   ·质粒 DNA 的抽提第32页
   ·限制性内切酶反应第32页
   ·实时荧光定量 PCR(Real time PCR)第32-33页
     ·BCA 法测蛋白浓度第33-34页
第四章 家蚕 NADK 基因的克隆及相关研究第34-46页
 1 材料与方法第34-37页
   ·实验动物材料第34页
   ·引物设计第34页
   ·家蚕总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA第34页
   ·RACE 反应第34-35页
   ·NADK 基因的 RNAi 处理第35-36页
   ·辅酶Ⅰ含量测定第36页
   ·辅酶Ⅱ含量测定第36页
   ·还原型谷胱甘肽测定方法第36-37页
   ·过氧化氢测定方法第37页
 2 结果与分析第37-45页
   ·家蚕 BmNADK 基因 cDNA 的克隆及分析第37-40页
   ·家蚕 5 龄不同发育时间点脂肪体和中肠组织中 BmNADK 的表达分析第40-41页
   ·RNAi 对家蚕 NADK 基因的表达及其相关氧化还原代谢的影响第41-45页
 3 讨论第45-46页
第五章 高温对家蚕 NADK 基因表达的影响第46-57页
 1 材料与方法第46-47页
   ·实验动物材料第46页
   ·高温处理方法及取材第46页
   ·总 RNA 的提取及反转录合成 cDNA第46-47页
   ·引物的设计第47页
   ·基因表达分析第47页
 2 结果与分析第47-55页
   ·34℃高温连续处理后,家蚕雌雄之间 NADK 基因表达的差异第47-50页
   ·42℃高温瞬间处理 3h 对家蚕 NADK 基因表达的影响第50-52页
   ·34℃连续性处理家蚕 7532 和皓月,其 NADK 基因的表达差异第52-55页
 3 讨论第55-57页
第六章 综合结论和展望第57-59页
 1 家蚕 NADK 基因的下调使得 NADPH、GSH 等物质含量活性下降第57页
 2 家蚕 NADK 基因表达和高温应激有关第57页
 3 不同家蚕品种对高温的应激反应在 NADK 基因表达方面存在差异第57-59页
参考文献第59-67页
研究生期间发表的文章及成果第67-69页
研究生期间科研资助项目第69-71页
附录第71-73页
致谢第73-74页

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