| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1 研究背景 | 第10页 |
| 2 国内外垃圾研究现状 | 第10-20页 |
| ·国内外餐厨垃圾现状 | 第10-12页 |
| ·餐厨垃圾技术处理研究现状 | 第12-14页 |
| ·纤维素研究进展 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的作用机制及理化性质 | 第15页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶基因研究进展 | 第16-20页 |
| ·利用巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第20页 |
| 3 研究意义 | 第20-21页 |
| 4 研究内容和研究目标 | 第21-23页 |
| ·主要研究内容 | 第21页 |
| ·研究目标 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 绿色木霉EGⅢ基因的克隆 | 第23-39页 |
| 1 材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基及培养条件 | 第24-25页 |
| ·绿色木霉的培养 | 第25页 |
| ·基因克隆技术 | 第25-30页 |
| 2 结果与讨论 | 第30-38页 |
| ·克隆载体PMD19-T | 第30页 |
| ·绿色木霉内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·PCR验证 | 第31-32页 |
| ·酶切鉴定 | 第32页 |
| ·绿色木霉EGⅢ全长序列生物信息学分析 | 第32-38页 |
| ·限制性酶切位点分析 | 第32-34页 |
| ·EGⅢ基因特性 | 第34-37页 |
| ·氨基酸密码子表 | 第37-38页 |
| 3 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 绿色木霉EGⅢ基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第39-52页 |
| 1 材料和方法 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39-40页 |
| ·主要培养基 | 第40页 |
| ·引物设计合成 | 第40页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第40-41页 |
| ·双酶切反应 | 第41页 |
| ·载体片段与目的基因片段酶切产物的纯化 | 第41页 |
| ·载体片段去磷酸化 | 第41-42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第42页 |
| ·PCR鉴定(阳性菌株判定) | 第42页 |
| ·酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母 | 第42-43页 |
| ·目的菌株的筛选 | 第43页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第43-45页 |
| 2 实验结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·表达载体pPIC9K | 第45页 |
| ·重组表达质粒的筛选和验证 | 第45-46页 |
| ·重组酵母的筛选和验证 | 第46-47页 |
| ·重组酵母生长及产酶条件优化 | 第47-50页 |
| ·诱导时间 | 第48页 |
| ·接种量 | 第48-49页 |
| ·pH | 第49-50页 |
| ·重组毕赤酵母表达产物的SDS-PAGE | 第50页 |
| 3 本章实验总结 | 第50-52页 |
| 第四章 结论与展望 | 第52-54页 |
| 1 结论 | 第52页 |
| 2 创新点 | 第52页 |
| 3 展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |