| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-21页 |
| ·香蕉枯萎病及尖孢镰刀菌概况 | 第8-9页 |
| ·香蕉枯萎病发病症状及病原菌侵染宿主的过程 | 第9-11页 |
| ·镰刀菌的入侵 | 第10页 |
| ·镰刀菌的定殖 | 第10页 |
| ·枯萎病的发病 | 第10-11页 |
| ·纤维素及其分子结构 | 第11-13页 |
| ·纤维素酶的研究概况 | 第13-16页 |
| ·纤维素酶的组成及结构 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶的分子结构 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第15页 |
| ·糖基水解酶家族(Glycoside hydrolase families) | 第15-16页 |
| ·真菌遗传转化的研究进展 | 第16-21页 |
| ·基因敲除 | 第16-17页 |
| ·基因沉默 | 第17-18页 |
| ·插入突变 | 第18-20页 |
| ·基因诱捕技术 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21页 |
| 2 尖孢镰刀菌纤维素酶基因敲除转化子的获得及突变体的筛选与验证 | 第21-61页 |
| ·材料、试剂、仪器及培养基 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·试剂、仪器及耗材 | 第22页 |
| ·培养基及主要试剂配方 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-47页 |
| ·尖孢镰刀菌古巴转化型4号生理小种(Foc4)的活化与培养 | 第23-24页 |
| ·Foc4的潮霉素抗性实验 | 第24页 |
| ·尖孢镰刀菌Foc4基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·目的基因序列的分析 | 第25页 |
| ·质粒pCX62的提取 | 第25-26页 |
| ·敲除载体的构建 | 第26-35页 |
| ·对敲除载体进行Foc4转化 | 第35-37页 |
| ·对转化子进行PCR验证 | 第37-41页 |
| ·转化子的Southern blot验证 | 第41-45页 |
| ·突变体的RT-PCR检测 | 第45-47页 |
| ·突变体的保存 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-60页 |
| ·Foc4的潮霉素抗性实验 | 第47页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·目的基因氨基酸序列的分析 | 第48-52页 |
| ·目的基因同源臂的克隆 | 第52-54页 |
| ·Ceg-1AB-pCX62和Ceg-2AB-pCX62质粒的酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·敲除载体的转化片段的获得 | 第55-56页 |
| ·Foc4原生质体的制备 | 第56页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第56-58页 |
| ·Southern blot验证结果 | 第58-59页 |
| ·突变体的RT-PCR检测 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 3 突变体△Foc4-01、△Foc4-02和△Foc4-1+2的生物学特征观察及致病力测试 | 第61-74页 |
| ·材料和试剂 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61-62页 |
| ·仪器 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-66页 |
| ·突变体菌落形态的观察及生长速率的测定 | 第62页 |
| ·突变体菌株产孢率的测定 | 第62页 |
| ·突变体的孢子形态观察 | 第62-63页 |
| ·突变体的菌丝形态观察 | 第63页 |
| ·过氧化氢压力筛选试验 | 第63页 |
| ·突变体在刚果红培养基上水解圈的观察 | 第63页 |
| ·纤维素酶活力的测定 | 第63-64页 |
| ·突变体的致病性检测 | 第64-66页 |
| ·实验结果 | 第66-73页 |
| ·突变体的菌落形态及生长曲线的测定 | 第66-67页 |
| ·突变体菌株产孢率的测定 | 第67页 |
| ·突变体的孢子及菌丝的形态观察 | 第67-69页 |
| ·过氧化氢压力筛选试验 | 第69页 |
| ·突变体在刚果红培养基上水解圈的观察 | 第69-70页 |
| ·纤维素酶活力的测定 | 第70-71页 |
| ·突变体的致病性检测 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 4 结论 | 第74-76页 |
| 5 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录1 本文所用的引物列表 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
