| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 主要仪器表 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 视黄酸激活基因8(Stra8)概述 | 第13-15页 |
| ·Stra8基因的发现 | 第13页 |
| ·Stra8基因的结构简述 | 第13页 |
| ·Stra8的生物学功能及组织表达特异性 | 第13-14页 |
| ·Stra8与减数分裂的关系 | 第14-15页 |
| 2 胚胎干细胞 | 第15-17页 |
| ·胚胎干细胞的研究进展 | 第15页 |
| ·鸡胚胎干细胞(cESCs)的研究进展 | 第15-16页 |
| ·胚胎干细胞的研究及发展前景 | 第16-17页 |
| 3 视黄酸(RA)概况 | 第17-19页 |
| ·视黄酸结构及其作用简述 | 第17-18页 |
| ·视黄酸的作用机理 | 第18-19页 |
| 4 苏禽黄鸡 | 第19页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 苏禽黄鸡Stra8基因克隆、真核表达载体构建及其生物信息学分析 | 第20-36页 |
| 1 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·实验对象 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·引物设计与合成 | 第20-21页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-27页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因克隆及载体构建 | 第22-26页 |
| ·苏禽黄鸡睾丸组织总RNA提取 | 第22页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因的扩增 | 第22-23页 |
| ·CaCl_2冷处理法制备感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因的TA克隆 | 第24页 |
| ·重组表达载体pEGFP-C1-Stra8的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| ·碱裂解法提取pEGFP-C1-Stra8质粒及去除内毒素 | 第25-26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因编码区(CDS)的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因cDNA序列分析 | 第26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白信号肽预测 | 第26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白亚细胞定位预测 | 第26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白二级结构预测 | 第26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白磷酸化及糖基化位点预测 | 第26页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白基本理化性质分析 | 第26页 |
| ·构建Stra8基因序列的进化树 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-34页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因克隆 | 第27-28页 |
| ·重组表达载体pEGFP-C1-Stra8的鉴定 | 第28页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因生物信息学分析结果 | 第28-34页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因cDNA序列分析结果 | 第28页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因蛋白信号肽预测结果 | 第28-29页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白亚细胞定位预测结果 | 第29页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白二级结构预测结果 | 第29-30页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因磷酸化及糖基化位点预测结果 | 第30-31页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8蛋白基本理化性质分析结果 | 第31-32页 |
| ·苏禽黄鸡Stra8基因的系统进化分析 | 第32-34页 |
| 3 分析与讨论 | 第34-35页 |
| 4 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 苏禽黄鸡Stra8基因亚细胞定位的研究 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·鼠抗鸡Stra8多克隆抗体制备及效价检测 | 第37-39页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)-Stra8的构建 | 第37-38页 |
| ·鼠抗鸡Stra8多抗的制备 | 第38页 |
| ·利用间接免疫荧光检测抗体效价及进行亚细胞定位 | 第38-39页 |
| ·体外重组Stra8基因的亚细胞定位研究及整合分析 | 第39-40页 |
| ·利用EGFP荧光蛋白进行亚细胞定位 | 第39页 |
| ·RT-PCR检测Stra8基因mRNA水平的表达 | 第39-40页 |
| ·Western Blot检测Stra8基因蛋白水平的表达 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| ·真核表达载体pcDNA3.1(+)-Stra8的鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接免疫荧光检测抗体效价及亚细胞定位结果 | 第41页 |
| ·利用荧光蛋白进行亚细胞定位及其整合分析结果 | 第41-43页 |
| ·利用EGFP荧光蛋白进行亚细胞定位结果 | 第41-42页 |
| ·Stra8基因在NIH-3T3细胞中mRNA水平的表达分析 | 第42页 |
| ·Stra8基因在NIH-3T3细胞中蛋白水平的表达分析 | 第42-43页 |
| 3 分析与讨论 | 第43-44页 |
| 4 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 RA诱导转染pEGFP-C1-Stra8的cESCs向雄性生殖细胞分化 | 第45-63页 |
| 1 材料与方法 | 第45-51页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·其他试剂的配制 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-51页 |
| ·鸡胚胎干细胞的分离培养 | 第46-48页 |
| ·鸡胚胎成纤维细胞用于制备饲养层 | 第46-47页 |
| ·鸡胚胎干细胞(cESC)的分离培养 | 第47-48页 |
| ·形态观察及利用碱性磷酸酶(AKP)鉴定细胞活性 | 第48页 |
| ·利用时相专一性胚胎抗原(SSEA-1)鉴定细胞发育全能性 | 第48页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-Stra8转染鸡胚胎干细胞 | 第48-49页 |
| ·选择最适转染胚胎干细胞的质粒浓度 | 第48页 |
| ·转染后鸡胚胎干细胞对G418的敏感性实验 | 第48页 |
| ·适宜浓度G418筛选阳性pEGFP-C1-Stra8鸡胚胎干细胞 | 第48-49页 |
| ·RA诱导Stra8基因标记的cESCs向雄性生殖细胞分化 | 第49-51页 |
| ·诱导各组细胞的形态学观察 | 第49页 |
| ·实时荧光定量PCR检测各组基因变化趋势 | 第49-50页 |
| ·数据分析 | 第50-51页 |
| ·诱导后细胞的间接免疫焚光检测 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-61页 |
| ·鸡胚胎成纤维细胞(CEF)生长状态 | 第51页 |
| ·鸡胚胎干细胞的生长特点及鉴定 | 第51-52页 |
| ·碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·表面抗原SSEA-1鉴定结果 | 第52页 |
| ·重组质粒转染鸡胚胎干细胞 | 第52-54页 |
| ·最适转染质粒量确定 | 第52-53页 |
| ·鸡胚胎干细胞对不同浓度G418的敏感性 | 第53页 |
| ·阳性细胞克隆筛选 | 第53-54页 |
| ·诱导各组的形态学观察及qRT-PCR检测基因变化结果 | 第54-58页 |
| ·4种基因在诱导实验各组中的表达规律 | 第58-60页 |
| ·间接免疫荧光鉴定结果 | 第60-61页 |
| 3 分析与讨论 | 第61-62页 |
| 4 本章小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69-70页 |
