| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一部分 实验部分 | 第11-52页 |
| 第一章 人凝血因子Ⅸ乳腺特异表达载体的构建及细胞转染 | 第11-32页 |
| 1 材料 | 第12-13页 |
| ·材料 | 第12页 |
| ·主要仪器设备 | 第12-13页 |
| 2 方法 | 第13-17页 |
| ·从人胎儿肝组织中分离扩增人凝血因子ⅨcDNA序列 | 第13页 |
| ·hFⅨ乳腺特异表达载体的构建 | 第13-14页 |
| ·猪乳腺上皮细胞的分离培养、染色体数目分析及免疫荧光染色 | 第14页 |
| ·G418筛选猪乳腺上皮细胞 | 第14-15页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞的制备及染色体数目分析 | 第15页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞SRY基因的鉴定 | 第15页 |
| ·6418筛选猪胎儿成纤维细胞 | 第15页 |
| ·猪乳腺上皮细胞和猪胎儿成纤维细胞转染和鉴定 | 第15-16页 |
| ·实时定量RT-PCR检测hFⅨ的表达情况 | 第16-17页 |
| 3 结果 | 第17-28页 |
| ·PCR扩增hFⅨ | 第17页 |
| ·BGH PolyA的PCR扩增 | 第17页 |
| ·BGH PolyA插入乳腺特异表达载体pbCSN2-RC | 第17页 |
| ·hFⅨ插入pbCSN2-BGHpA-RC及其插入方向的确定 | 第17-19页 |
| ·猪乳腺上皮细胞的分离 | 第19-20页 |
| ·猪乳腺上皮细胞的免疫荧光染色结果 | 第20页 |
| ·猪乳腺上皮细胞染色体数目分析 | 第20-21页 |
| ·猪乳腺上皮细胞对G418的敏感性 | 第21-22页 |
| ·在猪乳腺上皮细胞中不同比例的线性化质粒和脂质体组合的转染效率 | 第22-23页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞染色体数目分析 | 第23页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞SRY基因的鉴定 | 第23-24页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞对G418的敏感性 | 第24页 |
| ·在猪胎儿成纤维细胞中不同比例的线性化质粒和脂质体组合的转染效率 | 第24-25页 |
| ·实时定量PCR结果 | 第25-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 附图：人凝血因子Ⅸ表达载体pbCSN2-hFⅨ-pA构建流程图 | 第31-32页 |
| 第二章 hfat-1表达载体的构建及细胞转染 | 第32-51页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-37页 |
| ·改造pCAGDNA3 | 第33-34页 |
| ·构建pC-PGK-neo-pA | 第34页 |
| ·合成人源化序列hfat1 | 第34页 |
| ·构建pC-PGK-neo-hfat-1 | 第34页 |
| ·载体pC-PGK-neo-hfat-1的大量制备 | 第34页 |
| ·载体pC-PGK-neo-hfat-1的线性化 | 第34-35页 |
| ·电穿孔法转染猪胎儿成纤维细胞 | 第35页 |
| ·筛选稳定的转基因细胞 | 第35页 |
| ·鉴定转基因的猪胎儿成纤维细胞 | 第35-36页 |
| ·Cre重组酶将两个Loxp之间的DNA片段删除 | 第36页 |
| ·实时定量RT-PCR检测hfat-1的表达情况 | 第36-37页 |
| ·高效气相色谱分析 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-45页 |
| ·pCAGDNA3-CAGG菌落PCR及其酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·pC-PGK-neo-pA菌落PCR及其酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·pC-PGK-neo-hfat-1菌落PCR及其酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·鉴定转基因的猪胎儿成纤维细胞 | 第40-41页 |
| ·PCR鉴定：Cre重组酶将两个Loxp之间的DNA片段删除 | 第41-42页 |
| ·实时定量PCR结果 | 第42-44页 |
| ·高效气相色谱分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-50页 |
| 附图：hfat-1表达载体pC-PGK-neo-hfat-1构建流程图 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 第二部分 文献综述 转基因猪的研究进展和应用 | 第52-61页 |
| 转基因猪的研究进展 | 第52-56页 |
| 1、原核显微注射技术及在转基因猪中的应用 | 第52页 |
| 2、体细胞核移植技术及在转基因猪中的应用 | 第52-53页 |
| 3、胚胎干细胞介导技术及在转基因猪中的应用 | 第53-54页 |
| 4、逆转录病毒载体转染技术及在转基因猪中的应用 | 第54-55页 |
| 5、RNA干扰介导转基因技术及在转基因猪中的应用 | 第55页 |
| 6、精子载体技术及在转基因猪中的应用 | 第55-56页 |
| 转基因猪的应用 | 第56-59页 |
| 1、转基因育种 | 第56-57页 |
| 2、异种器官移植的供体 | 第57-58页 |
| 3、作为乳腺生物反应器 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第62页 |
