| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-14页 |
| 一 实验材料及方法 | 第14-30页 |
| (一) 实验材料 | 第14-16页 |
| (二) 实验方法 | 第16-30页 |
| 1. 基本实验操作 | 第16-22页 |
| 2. rhIFN-λ3基因的优化及合成 | 第22页 |
| 3. 重组表达质粒的构建 | 第22-24页 |
| 4. 重组蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第24-26页 |
| 5. 工程菌株的扩大培养 | 第26页 |
| 6. 菌体破碎及包涵体处理 | 第26-27页 |
| 7. 目的蛋白的纯化 | 第27页 |
| 8. 重组蛋白的Western blot分析 | 第27-28页 |
| 9. PEG修饰及修饰条件优化 | 第28-29页 |
| 10. PEG修饰产物的纯化 | 第29页 |
| 11. 体外抗病毒活性测定 | 第29-30页 |
| 二 结果与分析 | 第30-43页 |
| (一) 重组表达质粒pThioHisA-rhIFN-λ3的构建及鉴定 | 第30-32页 |
| 1. 重组质粒pThioHisA-rhIFN-λ3的构建 | 第30页 |
| 2. 重组质粒pThioHisA-rhIFN-λ3的鉴定 | 第30-32页 |
| (二) 融合蛋白HP-rhIFN-λ3的诱导表达 | 第32-33页 |
| 1. 表达宿主菌的筛选 | 第32页 |
| 2. 诱导剂浓度的优化 | 第32-33页 |
| 3. 诱导表达时间的优化 | 第33页 |
| (三) 重组蛋白的大量表达及纯化 | 第33-36页 |
| 1. 包涵体洗涤、复性及纯化 | 第33-34页 |
| 2 肠激酶酶切条件摸索 | 第34-36页 |
| 3. 肠激酶酶切产物的纯化 | 第36页 |
| (四) 重组蛋白的Western blot分析 | 第36-37页 |
| (五) 重组蛋白的PEG修饰条件优化 | 第37-39页 |
| 1. 反应温度对PEG修饰反应的影响 | 第37页 |
| 2. 投料比对PEG修饰反应的影响 | 第37-38页 |
| 3. 反应时间对修饰反应的影响 | 第38-39页 |
| (六) PEG修饰产物的纯化 | 第39-40页 |
| (七) 体外抗病毒活性测定 | 第40-43页 |
| 三、讨论 | 第43-49页 |
| (一) 人IFN-λ3基因的优化及诱导表达 | 第43-44页 |
| (二) 包涵体的复性 | 第44-45页 |
| (三) 包涵体的纯化及酶切分析 | 第45-46页 |
| (四) PEG修饰及纯化 | 第46-48页 |
| (五) 体外抗病毒活性的测定 | 第48-49页 |
| 四、小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
| 发表论文 | 第62-63页 |
