| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| ·温度和高浓度CO2的影响 | 第13-14页 |
| ·鱼的呼吸作用 | 第14-16页 |
| ·鱼鳃和它对渗透压、离子平衡和酸碱平衡的调节 | 第16-18页 |
| ·分子生物学研究基础 | 第18-19页 |
| ·研究目的 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·动物驯养实验 | 第20-21页 |
| ·时间系列高温驯养实验 | 第20-21页 |
| ·动物长时间驯养实验 | 第21页 |
| ·动物参数确定 | 第21-22页 |
| ·肝指数 Hepatosomatic Index (HSI) | 第21页 |
| ·Fulton's K 肥满度 | 第21页 |
| ·红细胞压积 | 第21页 |
| ·鱼鳃中总 RNA 的浓度 | 第21-22页 |
| ·血清渗透压 | 第22页 |
| ·主要离子运输通道的mRNA表达 | 第22-24页 |
| ·鱼鳃中总 RNA 的分离提取，DNase 酶消化和 cDNA 模板合成 | 第22页 |
| ·通过实时定量 PCR 来量化主要的离子运输通道基因 mRNA 表达水平 | 第22-24页 |
| ·Na+/K+-ATPase 的功能性特征 | 第24-27页 |
| ·鱼鳃粗提取液的制备 | 第24-25页 |
| ·孔雀绿微量分析 Na+/K+-ATPase 酶活性 | 第25-26页 |
| ·酶活性的温度敏感性（Q10值） | 第26-27页 |
| ·用特异抗体量化特异蛋白 | 第27-30页 |
| ·免疫印迹测试 | 第27页 |
| ·Slot blot | 第27-28页 |
| ·蛋白质与特异性初级抗体的结合和次级抗体的结合 | 第28-29页 |
| ·蛋白质信号检测 | 第29-30页 |
| ·蛋白质量的相对量化 | 第30页 |
| ·Cl~-/HCO_3~--exchanger (AE1)和 Na~+/HCO_3~--cotransporter (NBC1)的基因克隆和序列测定 | 第30-32页 |
| ·cDNA 的合成、单链 cDNA 的扩增和琼脂糖凝胶电泳 | 第30-32页 |
| ·基因克隆和序列分析 | 第32页 |
| ·不同组织中各个离子运输通道基因mRNA表达水平的确定 | 第32-33页 |
| ·数据分析和数据统计学 | 第33-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-54页 |
| ·动物参数 | 第34-37页 |
| ·肝指数（HSI） | 第34-35页 |
| ·Fulton's K 肥满度 | 第35页 |
| ·红细胞压积 Hct | 第35-36页 |
| ·RNA 浓度 | 第36-37页 |
| ·血清渗透压 | 第37-38页 |
| ·Na~+/HCO_3~--cotransporter (NBC1) and Cl~-/HCO_3~--anion exchanger (AE1)的序列分析 | 第38-39页 |
| ·重要的离子交换通道和离子运输通道基因的mRNA表达研究 | 第39-47页 |
| ·内参基因 | 第39-41页 |
| ·Na~+/K~+-ATPase (NKA)基因表达研究 | 第41-42页 |
| ·Na~+/HCO_3~-cotransporter (NBC1)基因表达研究 | 第42-43页 |
| ·Na~+/H~+-exchanger 亚型 1 (NHE1A)基因表达研究 | 第43-44页 |
| ·Na~+/H~+-exchanger 亚型 2 （NHE1B）基因表达研究 | 第44-45页 |
| ·Cl~-/HCO_3~--exchanger 亚型 1 （AE1A）基因表达研究 | 第45-46页 |
| ·Cl-/HCO3--exchanger 亚型 2 （AE1B）基因表达研究 | 第46-47页 |
| · | 第47-49页 |
| ·Na~+/K~+-ATPase 活性的温度敏感性 Q10值（Q10value） | 第47-48页 |
| ·Na~+/K~+-ATPase 活性的温度敏感性（Q10value）随着时间的变化 | 第48页 |
| ·温度和 CO_2对Na~+/K~+-ATPase 活性的影响 | 第48-49页 |
| ·Na~+/K~+~-ATPase 蛋白量 | 第49-51页 |
| ·Na~+/K~+~-ATPase α5 抗体的特异性检测 | 第49-50页 |
| ·用 Slot Blot 法测定 Na~+/K~+-ATPase 的蛋白含量 | 第50-51页 |
| ·Na~+/H~+-exchanger 1 抗体的特异性检测 | 第51-52页 |
| ·各种离子运输通道基因在鱼体内不同组织中量的分布 | 第52-54页 |
| 4 实验讨论 | 第54-67页 |
| ·温度和CO2对动物的总体影响 | 第54-56页 |
| ·温度和CO2对动物血清渗透压的影响及其与Na~+/K~+-ATPase 活性的相关性 | 第56-58页 |
| ·较高温度驯养对鱼鳃中Na~+/K~+-ATPase 的 mRNA 表达水平和功能活性的影响 | 第58-59页 |
| ·基因差异表达 | 第59-64页 |
| ·温度对 mRNA 表达的影响 | 第60-61页 |
| ·CO_2对mRNA 表达的影响 | 第61-62页 |
| ·对 Cl~-/ HCO~-3-exchanger 两个亚型 AE1A, AE1B 的定位 | 第62-63页 |
| ·温度和 CO_2对鱼鳃中mRNA表达差异影响的比较 | 第63-64页 |
| ·在高浓度CO_2驯养下，P.brachycephalum鱼鳃中的离子调节和酸碱平衡的调节 | 第64-67页 |
| 5 实验结论与前景展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 附录 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及及获奖情况 | 第82页 |
